[發明專利]MMHRL1轉基因小鼠肝腫瘤細胞系的建立及應用

有效

• 申請號: 201611160012.6
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN106635999B
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 王愛國;劉要甫;樊婷婷;王靖宇;王福金
• 申請（專利權）人: 大連醫科大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 沈陽銘揚聯創知識產權代理事務所(普通合伙) 21241
• 代理人: 屈芳

1.一種轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞，其特征在于，所述肝腫瘤細胞是H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞MMHRL1，它保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:C2016103；

所述H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞MMHRL1的制備方法具體包括以下過程：

無痛苦處死上述H-ras12V轉基因雄性小鼠，無菌術切下肝腫瘤；將肝腫瘤置于裝有常溫滅菌生理鹽水的10cm培養皿中，充分清理掉腫瘤包膜，使用手術刀將上述操作后留取的肝腫瘤組織切割至1×1×1mm³大小的組織塊，加入肝腫瘤組織培養液通過半干法培養；肝腫瘤組織培養液成分為DMEM high glucose培養基，添加10％熱滅活胎牛血清、100IU/ml青-鏈霉素、50mg/ml慶大霉素；新接種的肝腫瘤組織塊24h后換液，H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞培養過程中隔72h換液；半干法培養8天后即可以在肝腫瘤組織塊周圍觀察到有細胞爬出；此時對上述肝腫瘤組織進行常規細胞培養消化、鋪板，并在多次消化、鋪板過程中去除原有肝腫瘤組織培養中的成纖維細胞；原代細胞第一次傳代至第10代時即能夠得到大量形態均一的上皮樣細胞，命名為MMHRL1。

2.如權利要求1所述的H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞的子代細胞，其特征在于，所述子代細胞能夠導致裸鼠形成肝癌。

3.如權利要求1所述的H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞或權利要求2所述的子代細胞，其特征在于，所述細胞具有以下特征：

(a)100％細胞表達H-ras12V轉基因；

(b)具有免疫缺陷小鼠皮下成瘤能力。

4.如權利要求1所述的H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞或權利要求2所述的子代細胞的用途，其特征在于，用于在裸鼠體內產生肝腫瘤。

5.一種建立肝腫瘤動物模型的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)將1×10⁶-1×10⁸的權利要求1所述的H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞或權利要求2所述的子代細胞接種于裸鼠；

(b)飼養步驟(a)的裸鼠14-90天，獲得肝腫瘤動物模型。