[發(fā)明專利]大黃魚干擾素d基因啟動子序列及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611159343.8
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN106754923B
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳新華;丁揚;母尹楠
• 申請（專利權(quán)）人: 自然資源部第三海洋研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/66;A01K67/027
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

大黃魚干擾素d基因啟動子序列及其應(yīng)用，涉及干擾素IFNd基因啟動子。提供大黃魚IFNd基因啟動子的序列、大黃魚IFNd基因啟動子的活性分析方法、大黃魚IFNd基因啟動子的應(yīng)用。采用基因組步移的方法克隆了大黃魚IFNd基因啟動子，提供大黃魚IFNd基因啟動子序列；經(jīng)報告基因分析實驗證明大黃魚IFNd基因啟動子可被poly(I:C)、LPS、PGN及細(xì)菌基因組DNA誘導(dǎo)激活。大黃魚IFNd基因啟動子的克隆及其強啟動子活性的驗證，為研究大黃魚IFNd基因的表達調(diào)控機理提供良好的實驗系統(tǒng)，在應(yīng)用方面為利用該啟動子構(gòu)建表達載體高效表達外源基因或?qū)⒃搯幼討?yīng)用于轉(zhuǎn)基因魚構(gòu)建創(chuàng)造條件。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及干擾素IFNd基因啟動子，尤其是涉及大黃魚干擾素IFNd基因啟動子序列及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

干擾素(Interferon，IFN)是一類能誘導(dǎo)脊椎動物細(xì)胞抗病毒狀態(tài)，并在抗病毒防御中起重要作用的誘導(dǎo)性多基因家族細(xì)胞因子(1.Robertsen B.The interferon systemof teleost fish[J].Fish Shellfish Immunol,2006,20(2):172-191)。硬骨魚類作為低等脊椎動物也擁有相對完善的干擾素系統(tǒng)。魚類IFNs分為I型IFNs和II型IFNs兩大類，其中I型IFNs因其專一性地協(xié)調(diào)宿主抗病毒免疫而受到更多的關(guān)注(2.Zhang YB,GuiJF.Molecular regulation of interferon antiviral response in fish[J].Dev CompImmunol,2012,38(2):193-202.)。根據(jù)成熟肽中半胱氨酸的數(shù)量及分布，魚類I型IFNs分為group I IFN(成熟肽含2個半胱氨酸)和group II IFN(成熟肽含4個半胱氨酸)。Group IIFN包括IFNa、IFNd和IFNe 3個亞組，group II IFN包括IFNb、IFNc和IFNf3個亞組(3.ZouJ,Gorgoglione B,Taylor NG,et al.Salmonids have an extraordinary complex typeI IFN system:characterization of the IFN locus in rainbow trout oncorhynchusmykiss reveals two novel IFN subgroups[J].J Immunol,2014,193(5):2273-2286)。基因的表達調(diào)控已成為分子生物學(xué)研究領(lǐng)域的熱點，啟動子是基因表達調(diào)控的重要元件。鑒于魚類I型IFNs在抗病毒免疫及病毒病防治中的重要性，研究其基因表達調(diào)控機制將為通過調(diào)節(jié)IFN的表達來防治魚類病毒病提供新的思路。對魚類I型IFNs基因5′側(cè)翼調(diào)控區(qū)序列的分析表明，魚類I型IFNs基因啟動子存在多個轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點，如IRF3、IRF7、NF-κB和ISRE等，并且具有復(fù)雜的表達調(diào)控機制。

本申請人在前期通過全基因組序列分析，發(fā)現(xiàn)了1條編碼大黃魚I型IFN的基因序列(4.Ao JQ,Mu YN,Xiang LX,et al.Genome sequencing of the perciform fishLarimichthys crocea provides insights into stress adaptation[J].Plos Genet,2015,11(4):e1005118)。同源比對及進化分析表明該I型IFN為IFNd，屬于魚類group IIFNs。由于啟動子是決定基因表達及其調(diào)控的關(guān)鍵因素，為研究大黃魚IFNd基因的表達調(diào)控機制，從其基因組進一步克隆了大黃魚IFNd基因的5′側(cè)翼啟動子序列，經(jīng)報告基因檢測實驗證明了該大黃魚IFNd基因啟動子具有較強的啟動子活性。該大黃魚IFNd基因啟動子的克隆及其啟動子活性的驗證，在理論上將為研究大黃魚IFNd基因的表達調(diào)控機理提供良好的實驗系統(tǒng)，在應(yīng)用方面為利用該強啟動子構(gòu)建表達載體高效表達外源基因或?qū)⒃搯幼討?yīng)用于轉(zhuǎn)基因魚構(gòu)建創(chuàng)造了條件，具有重要的理論和實際意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于提供大黃魚IFNd基因啟動子的序列。