[發(fā)明專利]大黃魚干擾素d基因啟動子序列及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611159343.8
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN106754923B
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳新華;丁揚;母尹楠
• 申請（專利權(quán)）人: 自然資源部第三海洋研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/66;A01K67/027
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

1.大黃魚IFNd基因啟動子，其特征在于其序列為：

2.如權(quán)利要求1所述大黃魚IFNd基因啟動子的活性分析方法，其特征在于包括以下步驟：

1)采用Promega公司雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)定量分析所述大黃魚IFNd基因啟動子的活性以及人工合成雙鏈RNA poly(I:C)、大腸桿菌脂多糖LPS、枯草芽孢桿菌肽聚糖PGN和嗜水氣單胞菌基因組DNA刺激對其活性的影響；

2)將所述大黃魚IFNd基因啟動子區(qū)片段插入Promega公司熒光素酶報告基因載體pGL3-Basic中，使螢火蟲熒光素酶基因位于該啟動子的控制下，構(gòu)建得到重組載體pGL3-IFNdP；用重組載體pGL3-IFNdP和海腎熒光素酶報告基因載體pRL-TK共同轉(zhuǎn)染EPC細胞，48h后收集轉(zhuǎn)染細胞；利用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)分別檢測螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的酶活性值，通過計算二者酶活性值的比值得出轉(zhuǎn)染細胞中熒光素酶的相對活性；

3)以空載體pGL3-Basic和海腎熒光素酶對照報告基因載體pRL-TK共同轉(zhuǎn)染EPC細胞的熒光素酶相對活性作為對照，計算出該啟動子的相對活性，再用poly(I:C)、脂多糖LPS、肽聚糖PGN及細菌基因組DNA刺激pGL3-IFNdP轉(zhuǎn)染的EPC細胞，通過分析各處理組熒光素酶相對活性的變化，來確定大黃魚IFNd基因啟動子的活性是否受刺激物誘導(dǎo)的影響。

3.如權(quán)利要求1所述大黃魚IFNd基因啟動子在構(gòu)建真核表達載體在魚類細胞或哺乳動物細胞中高效表達外源基因中應(yīng)用。

4.如權(quán)利要求1所述大黃魚IFNd基因啟動子在構(gòu)建轉(zhuǎn)基因魚中應(yīng)用。