[發明專利]一種來源于馬糞海膽生殖腺的水溶性多糖的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201611156630.3
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN106589155B
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 王春華;趙峰;劉永俊;辛文妤;侯桂革;杜敏
• 申請（專利權）人: 濱州醫學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P35/00
• 代理公司: 煙臺雙聯專利事務所(普通合伙) 37225
• 代理人: 呂靜

本發明涉及醫藥領域，具體涉及一種來源于馬糞海膽生殖腺的水溶性多糖的制備方法及其應用。本發明具體方法為高溫加熱使海膽生殖腺中的酶失活，然后以低于60℃水提取多糖，提取液離心，上清液減壓濃縮，依次用木瓜蛋白酶酶解和Sevage法除蛋白，水溶液經透析、醇沉、干燥得海膽總多糖，總多糖用凝膠柱色譜分離純化得到兩個多糖。本發明所用的提取溫度低，不影響多糖結構和活性，提取液中雜質少，后處理方法簡單，極大地降低了生產成本。所得總多糖性狀和復溶性好，易于制備多種藥物制劑。總多糖及其含有的兩種多糖均有較好的抗腫瘤作用，可開發成無毒副作用的抗腫瘤藥物。

技術領域

本發明涉及一種馬糞海膽生殖腺多糖的制備方法及其抗腫瘤應用，屬于醫藥技術領域。

背景技術

多糖是由單糖通過苷鍵聚合而成的一類高分子化合物，廣泛分布于動植物及海洋生物體內，在治療心血管疾病、抗腫瘤、抗肝炎和抗衰老等方面具有獨特的生物活性，因此對糖類的研究一直十分活躍。

由于高鹽、高壓、低溫、缺氧等特殊環境，海洋生物體內常代謝出結構獨特和活性顯著的物質，近年從海洋動物得到多種活性多糖類物質。海膽是棘皮動物門海膽綱生物，在我國沿海海域分布廣泛，能食用的經濟型海膽主要為紫海膽(Anthocidariscrassispina)、光棘球海膽(Strongylocentrotus nudus)和馬糞海膽(Hemicentrotuspulcherrimus)等幾個品種。海膽殼棘作為中藥使用歷史悠久，具有“軟堅散結，化痰消腫，消瘰疬痰核，積痰不化，胸肋脹痛”之功效。黃色的海膽生殖腺在海膽繁殖期發育成熟，含有豐富的不飽和脂肪酸、氨基酸和微量元素等營養成分，是一種高級海洋食品資源。近年發現，海膽生殖腺含有的多糖類成分具有降血脂、抑制胃潰瘍、增強機體免疫機能等多種生理活性，具有很高的藥用價值。

多糖由單糖聚合而成，隨著聚合程度增加，分子量增加，水溶性隨之降低，升高水溫可提高溶解度。目前海膽中發現的多糖的分子量多為百萬級，分子聚合程度高，因此提取溫度設置在80℃-100℃，以增加多糖溶解度。升高溫度可提高多糖的提取效率，但提取液中的雜質增多，將影響多糖的純化效果，也增加后期純化工序，造成多糖的損耗。

另外，多糖是高分子化合物，同蛋白質一樣存在高級結構，且與其活性密切相關，長時間加熱可能會改變其高級結構，影響其生物學活性。

不同種系的海膽體內代謝產生的多糖結構不同，理化性質不同，本發明涉及的多糖是從馬糞海膽生殖腺中提取和純化得到。優化提取方法的實驗結果表明，較低溫度下(40-50℃)和10倍量水即達最佳提取效率(圖1)，這說明馬糞海膽所含多糖易溶于水，低于常規溫度可實現高效提取。

平行實驗比較了50℃與90℃水提多糖的各項參數，低溫提取具有以下優點：

(1)提取液透明度更高，所含雜質更少，不僅簡化后期純化工序，而且低溫提取減少能耗，極大的降低生產成本。

(2)低溫獲取的多糖提取液穩定性更好，久置無沉淀析出。經同樣純化方法所得多糖為白色粉末，常溫下易溶于水，利于進一步純化和生物學活性篩選實驗。

(3)多糖產品的水溶性好，水溶液穩定，不僅具有更好的生物利用度，也有利于后期藥物不同劑型的設計與開發。

(4)低溫獲取的總多糖及其經柱色譜分離純化得到的兩個多糖對腫瘤細胞BEL-7402、Panc-28、U20S、HepG2、SGC7901和THP-1均有不同程度的抑制作用(圖3-圖8)，而90℃提取得到的總多糖對上述細胞未表現出抑制活性。

在發現馬糞海膽所含多糖常溫下易溶于水的基礎上，本發明系統性篩選并確定了一種海膽多糖的高效、低成本的提取和純化方法，與高溫水提多糖相比，本發明所得多糖具有更好的水溶性、穩定性及抗腫瘤活性。目前國內外鮮有探討提取溫度對多糖活性影響的研究。

發明內容