[發明專利]一種增加植物來源糖基轉移酶基因可溶性異源表達的方法

有效

• 申請號: 201611150967.3
• 申請日: 2016-12-14
• 公開（公告）號: CN106591338B
• 公開（公告）日: 2019-07-19
• 發明（設計）人: 李艷;陳量量;嚴明;陳可泉;郝寧;歐陽平凱
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/70;C12N9/10
• 代理公司: 南京匯恒知識產權代理事務所(普通合伙) 32282
• 代理人: 王月霞

1.一種增加植物來源糖基轉移酶基因可溶性異源表達的方法，其特征在于，將標簽蛋白基因與目標蛋白基因構建到表達載體上，導入到大腸桿菌中構建得到重組菌，重組菌誘導表達，標簽蛋白與目標蛋白進行融合表達，提高糖基轉移酶在大腸桿菌中的可溶性表達；所述標簽蛋白基因為3’-磷酸腺苷-5’磷酸酶基因、2-氧代-3-脫氧-6磷酸葡萄糖酸醛縮酶基因或者抗終止作用因子基因中的一種，所述目標蛋白基因為植物來源糖基轉移酶基因；將標簽蛋白基因構建在表達載體的Nde I和Hind III之間，將目標蛋白構建在Hind III和EcoR I之間，且標簽蛋白和目標蛋白的之間添加一組腸激酶酶切位點，蛋白序列為DDDDK；所述目標蛋白基因為甜葉菊來源的糖基轉移酶基因，為GenBank accession no:AAR06912，基因序列見SEQ.No.1所示；所述3’-磷酸腺苷-5’磷酸酶基因為GenBankaccession no: BAE78215，基因序列見SEQ.No.2所示；2-氧代-3-脫氧-6磷酸葡萄糖酸醛縮酶基因為GenBank accession no:YP_006120211，基因序列見SEQ.No.3所示；抗終止作用因子基因為GenBank accession no: AAC76203，基因序列見SEQ.No.4所示。

2.根據權利要求1所述的一種增加植物來源糖基轉移酶基因可溶性異源表達的方法，其特征在于，所述重組菌誘導表達條件為：將重組菌接種到LB培養基中，于20~37℃、250rpm振蕩培養8h，再將培養菌液按2%接種量接入LB培養基中，于200rpm， 20~37℃培養2h，待OD₆₀₀達到0.2時，添加誘導劑后轉18~25℃誘導培養16~30h，離心收集菌體。

3.根據權所述利要求2所述的一種增加植物來源糖基轉移酶基因可溶性異源表達的方法，其特征在于，所述誘導劑為異丙基-β-D-硫代半乳糖苷，用量為0.1~1.0mM。

4.根據權利要求2所述的一種增加植物來源糖基轉移酶基因可溶性異源表達的方法，其特征在于，所述誘導培養溫度為25℃，誘導時間為22h。