[發明專利]一種方法培養T記憶干細胞

在審

• 申請號: 201611149261.5
• 申請日: 2016-12-14
• 公開（公告）號: CN108218994A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 黃飛;史子嘯;金濤;王海鷹;何鳳
• 申請（專利權）人: 上海恒潤達生生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;C12N7/01;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02
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• 代理人: 暫無信息

1.一種融合蛋白，所述融合蛋白選自：

(1)含有依次連接的CD8抗原的前導肽、抗CD19單鏈抗體、人CD8α鉸鏈區、人CD28跨膜區、人CD28胞內區和人CD3ζ胞內區的融合蛋白；和

(2)在(1)限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且保留活化T細胞活性的由(1)衍生的融合蛋白；

優選地，所述抗CD19單鏈抗體為抗CD19單克隆抗體FMC63。

2.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有以下一個或多個特征：

所述CD8抗原前導肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第1-21位氨基酸所示；

所述抗CD19單鏈抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第22-128位氨基酸所示；

所述抗CD19單鏈抗體的重鏈可變區的氨基酸序列可如SEQ ID NO:1第144-263位氨基酸所示；

所述人CD8α鉸鏈區的氨基酸序列如SEQ ID NO:3第264-310位氨基酸所示；

所述人CD28跨膜區的氨基酸序列如SEQ ID NO:3第311-337位氨基酸所示；

所述人CD28胞內區的氨基酸序列如SEQ ID NO:3第338-378位氨基酸所示；和

所述人CD3ζ胞內區的氨基酸序列如SEQ ID NO:3第379-489位氨基酸所示。

3.如權利要求2所述的多核苷酸序列，其特征在于，

在所述抗CD19單鏈抗體的編碼序列前的所述信號肽的編碼序列如SEQ ID NO:1第1-63位核苷酸序列所示；和/或

所述抗CD19單鏈抗體的輕鏈可變區的編碼序列如SEQ ID NO:1第64-384位核苷酸序列所示；和/或

所述抗CD19單鏈抗體的重鏈可變區的編碼序列如SEQ ID NO:1第430-789位核苷酸序列所示；和/或

所述人CD8α鉸鏈區的編碼序列如SEQ ID NO:1第790-930位核苷酸序列所示；和/或

所述人CD28跨膜區的編碼序列如SEQ ID NO:1第931-1010位核苷酸序列所示；和/或

所述人CD28胞內區的編碼序列如SEQ ID NO:1第1011-1134位核苷酸序列所示；和/或

所述人CD3ζ胞內區的編碼序列如SEQ ID NO:1第1135-1467位核苷酸序列所示。

4.一種融合蛋白，所述融合蛋白選自：

(1)含有依次連接的抗CD19單鏈抗體、人CD8α鉸鏈區、人CD28跨膜區、人CD28胞內區和人CD3ζ胞內區；和

(2)在(1)限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且保留活化T細胞活性的由(1)衍生的融合蛋白；

優選地，所述抗CD19單鏈抗體為抗CD19單克隆抗體FMC63。

5.如權利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有以下一個或多個特征：

所述融合蛋白在所述抗CD19單鏈抗體的N端還含有信號肽，優選地，所述信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第1-21位氨基酸所示；

所述抗CD19單鏈抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第22-128位氨基酸所示；

所述抗CD19單鏈抗體的重鏈可變區的氨基酸序列可如SEQ ID NO:1第144-263位氨基酸所示；

所述人CD8α鉸鏈區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第264-310位氨基酸所示；

所述人CD28跨膜區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第311-337位氨基酸所示；

所述人CD28胞內區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第338-378位氨基酸所示；

所述人CD3ζ胞內區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第379-489位氨基酸所示。

6.一種核酸構建物，所述核酸構建物含有權利要求1-3中任一項所述的多核苷酸序列；

優選地，所述核酸構建物為載體；

更優選地，所述核酸構建物為逆轉錄病毒載體，含有復制起始位點，3’LTR，5’LTR，以及權利要求1-3中任一項所述的多核苷酸序列。