[發(fā)明專利]擴(kuò)增兜蘭屬B類MADS-box基因的引物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611147999.8
• 申請日: 2016-12-13
• 公開（公告）號(hào): CN106755383B
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈瑞冬;周妍慧;葛紅;楊樹華;趙鑫;徐玉鳳
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京市鑄成律師事務(wù)所 11313
• 代理人: 王建秀;郝文博

本發(fā)明提供了一組用于分離兜蘭屬B類MADS?box基因，包括PahePI、PaheAP3A1、PaheAP3A2、PaheAP3B1、PaheAP3B2的引物以及包括所述引物的試劑盒。本發(fā)明還提供了開發(fā)上述引物的方法。本發(fā)明另外提供了利用上述引物，通過巢式PCR方法從兜蘭屬植物分離B類MADS?box基因的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及用于擴(kuò)增兜蘭屬B類MADS-box基因，包括PahePI、PaheAP3A1、PaheAP3A2、PaheAP3B1、PaheAP3B2的引物。具體而言，本發(fā)明涉及上述引物以及包括所述引物的試劑盒。本發(fā)明還涉及開發(fā)上述引物的方法以及利用上述引物分離B類MADS-box基因的方法。本發(fā)明另外涉及利用上述引物擴(kuò)增得到的基因序列進(jìn)行遺傳關(guān)系分析的應(yīng)用。

背景技術(shù)

MADS-box基因的命名源于最初發(fā)現(xiàn)的四個(gè)家族成員的首字母：MCM1(MiniChromosom Maintenancel，酵母微染色體維持基因)、AGAMOUS(擬南芥輪生器官確定性基因)、DEFICIENS(金魚草輪生器官確定性基因)和SRF(Serum Response Factor，人血清應(yīng)答因子)(Norman C等,“Isolation and properties of cDNA clones encoding SRF,atranscription factor that binds to the c-Fos serum response element,”Cell,1988,55:989-1003；Passmore等,“Saccharomyces cerevisiae protein involved inplasmid maintenance is necessary for mating of MAT a cells,”Journal ofBiochemistry and Molecular Biology,1988,204:593-606；Sommer等,“Genetic controlof flower development by homeotic genes in Antirrhinum majus,”Science,1990,250(4983):931-936；Yanofsky等,“The protein encoded by the Arabidopsis homeoticgene agamous resembles transcription factors,”Nature,1990,346(6279):35-39)。這4 種基因編碼的蛋白質(zhì)都有一段由56-58個(gè)氨基酸組成的位于N端的高度保守區(qū)域，將編碼這類蛋白因子的基因稱為MADS-box基因(Riechmann等,“MADS domain proteins in plantdevelopment,”Biological Chemistry,1997,378:1079-1101)。 MADS-box基因所編碼的MADS-box蛋白質(zhì)是一類重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，其功能貫穿于整個(gè)植物發(fā)育過程，包括確定花分生組織，調(diào)節(jié)植物開花時(shí)間，調(diào)控花器官，影響果實(shí)、根、葉等器官的發(fā)育等。

根據(jù)基因結(jié)構(gòu)、蛋白結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系的不同，MADS-box基因分為Type I 和Type II兩大類型(Becker等,“The major clades of MADS-box genes and their rolein the development and evolution of flowering plants,”Molecular Phylogeneticsand Evolution,2003,29(2003):464-489)。在陸生植物中，這兩大類型分別被稱為M型MADS-box基因和MIK^C型MADS-box基因。目前從植物中分離得到的A類、B 類、C類、D類、E類等同源異型基因，大部分均屬于MIKC^C型MADS-box家族，它們在植物花器官進(jìn)化、形態(tài)多樣性等方面起到關(guān)鍵作用。