[發(fā)明專利]一種有機(jī)磷農(nóng)藥的電化學(xué)檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611145712.8
• 申請(qǐng)日: 2016-12-13
• 公開（公告）號(hào): CN106525949B
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙波;楊琦;邵科峰;周斌華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/48
• 分類號(hào): G01N27/48
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

本發(fā)明公開了一種有機(jī)磷農(nóng)藥的電化學(xué)檢測(cè)方法。所述的檢測(cè)方法為：首先制備石墨烯‐殼聚糖‐對(duì)硫磷復(fù)合物修飾的電化學(xué)傳感器，然后以K₃[Fe(CN)₆]為探針，基于乙酰膽堿酯酶能與有機(jī)磷農(nóng)藥發(fā)生強(qiáng)烈結(jié)合作用的原理，進(jìn)行差分脈沖伏安(DPV)掃描，記錄響應(yīng)電流，通過相關(guān)數(shù)據(jù)的分析與推導(dǎo)，即可得到待測(cè)樣品中相應(yīng)有機(jī)磷農(nóng)藥的濃度。本發(fā)明提供的檢測(cè)方法對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)限在0.012～0.23ng/mL之間，線性范圍為1～1500ng/mL。本發(fā)明具有如下的有益效果：與其他利用酶抑制法進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)藥快速檢測(cè)的方法相比，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法無需進(jìn)行酶促反應(yīng)，因此大大節(jié)省了檢測(cè)時(shí)間，同時(shí)也避免了因?yàn)椴捎貌煌瑏碓吹拿杆鶎?dǎo)致檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性差的問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全檢測(cè)和分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種有機(jī)磷農(nóng)藥的電化學(xué)檢測(cè)方法，具體的說是涉及一種基于乙酰膽堿酯酶和有機(jī)磷農(nóng)藥具有強(qiáng)烈結(jié)合作用的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

我國(guó)是個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó)，每年進(jìn)出口的農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量居世界首位。有機(jī)磷農(nóng)藥因具有品種多、藥效高、殺蟲譜寬等特點(diǎn)，已逐漸成為我國(guó)應(yīng)用最廣、使用量最大的一類殺蟲劑。有機(jī)磷農(nóng)藥在給我國(guó)帶來巨大經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí)，也給食品安全、生態(tài)系統(tǒng)等帶來了巨大的危害。近些年來，有機(jī)磷農(nóng)藥急性中毒事件頻發(fā)，此類有機(jī)磷農(nóng)藥中毒事件后果嚴(yán)重，影響惡劣，因此，近年來國(guó)家對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥使用的監(jiān)管和要求已日趨嚴(yán)格。

目前有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)方法主要包括氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、高效液相色譜法以及酶抑制法等。色譜類分析方法需要大型分析儀器，過程操作繁瑣，不能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，CN 103901129 A公開的一種磁分離-氣相色譜檢測(cè)十種有機(jī)磷農(nóng)藥方法，其所使用的檢測(cè)方法就是色譜類分析方法；酶抑制法則由于儀器小型化、檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)勢(shì)在有機(jī)磷快速檢測(cè)領(lǐng)域占有一席之地，CN 103421880 B公開了一種有機(jī)磷農(nóng)藥檢測(cè)方法，其采用的就是典型的酶抑制法。然而，由于所使用的酶來源多樣，其催化選擇性和催化活性大有差異，給實(shí)際檢測(cè)的重復(fù)性和可靠性帶來了不利的影響。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明利用分子模擬方法對(duì)傳感器進(jìn)行了設(shè)計(jì)，首先模擬研究了殼聚糖對(duì)對(duì)硫磷的修飾作用以及乙酰膽堿酯酶與有機(jī)磷農(nóng)藥的識(shí)別機(jī)制，發(fā)現(xiàn)對(duì)硫磷與殼聚糖具有很強(qiáng)的分子間作用力，有利于修飾；利用乙酰膽堿酯酶與有機(jī)磷農(nóng)藥小分子的結(jié)合作用，分析了有機(jī)磷小分子的關(guān)鍵作用基團(tuán)和位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)殼聚糖上修飾的小分子取向完全可以被乙酰膽堿酯酶識(shí)別，適合于該類傳感器的研制。基于此，本發(fā)明提供了一種無需酶促反應(yīng)、檢測(cè)時(shí)間短、可檢測(cè)多種有機(jī)磷農(nóng)藥的電化學(xué)檢測(cè)方法。

本發(fā)明的目的在于提供一種有機(jī)磷農(nóng)藥的電化學(xué)檢測(cè)方法，所述檢測(cè)方法快速、高效、靈敏度高、穩(wěn)定性好。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

一種有機(jī)磷農(nóng)藥的電化學(xué)檢測(cè)方法，包括以下步驟：

1)電化學(xué)傳感器的制備：將石墨烯-殼聚糖-對(duì)硫磷復(fù)合物滴涂于干凈的玻碳電極表面，制得有機(jī)磷農(nóng)藥多殘留檢測(cè)電化學(xué)傳感器；

2)孵育液的配制：配制含有有機(jī)磷農(nóng)藥和乙酰膽堿酯酶(AChE)的磷酸緩沖溶液(PBS)，下稱孵育液；

3)工作曲線的建立：將步驟1)所述的電化學(xué)傳感器浸入步驟2)所述孵育液中孵育，以磷酸緩沖溶液沖洗干凈，在K₃[Fe(CN)₆]溶液中進(jìn)行差分脈沖伏安(DPV)掃描，記錄響應(yīng)電流；空白標(biāo)樣的響應(yīng)電流為I₀，含有有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)樣的響應(yīng)電流為I_x，響應(yīng)電流的增加值ΔI等于I_x與I₀的差值；將所述ΔI與孵育液中有機(jī)磷農(nóng)藥的濃度C繪制成ΔI-C工作曲線，采用線性回歸法得到ΔI-C線性回歸方程；