[發(fā)明專利]一種檢測聚丙烯酰胺凝膠中DNA的銀染試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611144993.5
• 申請日: 2016-12-13
• 公開（公告）號: CN106596232B
• 公開（公告）日: 2019-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭培國;李榮華;劉文杰;夏巖石
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州大學(xué)
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N27/447
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務(wù)所(普通合伙) 44244
• 代理人: 胡濟(jì)元;張祖華

本發(fā)明涉及一種檢測聚丙烯酰胺凝膠中DNA的銀染試劑盒，該試劑盒包括：試劑A：該試劑為水溶液，且每一升該水溶液中具有冰醋酸3～5mL、硝酸銀1～3g和乙醇50～100mL；試劑B：該試劑為水溶液，且每一升該水溶液中具有氯化鈉0.5～1g、亞硫酸鈉0.5～2.5g、碳酰肼0.1～0.3g、碳酸鈉2～10g和葡萄糖5～10g；試劑C：該試劑為水溶液，且每一升該水溶液中具有冰醋酸3～5mL。本試劑盒不僅擯棄了危害人體健康的甲醛，而且具有檢測的靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及借助于測定材料的化學(xué)或物理性質(zhì)來測試或分析材料，具體涉及聚丙酰胺凝膠電泳方法中檢測DNA的銀染試劑。

背景技術(shù)

聚丙烯酰胺凝膠的銀染法是檢測DNA分子標(biāo)記的常用方法之一，該方法具有高的靈敏度和高的分辨率，可區(qū)分1個(gè)堿基的差異【Sambrook J,Fritsch EF,ManiatisT.Molecular Cloning:A laboratory manual.Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989,304-306】和鑒別出低至27.8pg的DNA【An Z,Xie L,Cheng H,Zhou Y,Zhang Q,He X,Huang H.A silver staining procedure for nucleic acids in polyacrylamide gelswithout fixation and pretreatment.Anal Biochem,2009,391:77-79】。但從目前業(yè)已報(bào)道的檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的傳統(tǒng)經(jīng)典銀染方法【Bassam BJ,Caetano AG,Gresshoff PM.Fastand sensitive silver staining of DNA in polyacrylamide gels.Anal Biochem,1991,196(1):80-83)及改良銀染方法(Liang Q,Wen D,Xie J,Liu L,Wei Y,Wang Y,ShiS.A rapid and effective method for silver staining of PCR products separatedin polyacrylamide gels.Electrophoresis,2014,35(17):2520-2523】所需試劑來看，甲醛是現(xiàn)在所有銀染方法顯色步驟中的必需試劑，使用濃度在370～1480mg/L之間【郭培國,劉文杰,李海洋,王直亮,夏巖石,李榮華.一種快速有效檢測SSR標(biāo)記的聚丙烯酰胺凝膠的銀染方法.廣州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2016，(4):1-6】。

眾所周知，甲醛是一種易溶于水的高刺激性有毒氣體，在常溫下易揮發(fā)；環(huán)境中的甲醛屬于一種嚴(yán)重影響人類健康的污染物。它對人體的危害主要包括(1)刺激作用：主要表現(xiàn)在對皮膚黏膜的刺激作用，且能與蛋白質(zhì)的氨基結(jié)合，高濃度吸入時(shí)出現(xiàn)呼吸道嚴(yán)重的刺激和水腫、眼刺激和頭痛等癥狀；(2)致敏作用：主要表現(xiàn)在皮膚直接接觸甲醛可引起過敏性皮炎、色斑、組織細(xì)胞壞死；(3)致突變作用：屬于基因毒性物質(zhì)，是潛在的強(qiáng)致突變物之一，如可引起鼻咽腫瘤等(閆金萍.甲醛及其對人體的危害.化學(xué)世界，2004(10):558-559)。因其毒性較大，目前世界衛(wèi)生組織(WHO)和美國環(huán)境保護(hù)局(EPA)均將甲醛列為潛在危險(xiǎn)致癌物和重要環(huán)境污染物(徐向榮和徐增康.甲醛的危害及其衛(wèi)生檢驗(yàn)方法.職業(yè)與健康，2003,19(12):47-49)；在我國有毒化學(xué)品優(yōu)先控制名單中，甲醛高居第二位【周雪媚，李玉光，陳霜玲，付慧群，姜思朋，王永.一株高效甲醛降解菌的分離篩選與降解特性研究.生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào)，2015,24(12):2040-2044】。對于利用銀染法檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的操作人員來講，長期使用和接觸甲醛溶液，人體不可避免吸入揮發(fā)在空氣中的甲醛、或經(jīng)皮膚接觸導(dǎo)致甲醛侵入人體，從而危害身體健康。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種檢測聚丙烯酰胺凝膠中DNA的銀染試劑盒，該試劑盒不僅可替代現(xiàn)有的DNA銀染試劑，而且不含對操作人員身體健康有害的甲醛。

本發(fā)明解決上述問題的技術(shù)方案是：