[發明專利]多表位測定

有效

• 申請號: 201611143352.8
• 申請日: 2011-06-14
• 公開（公告）號: CN106771219B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: G·薩瓦特;M·W·J·普林斯;T·H·埃弗斯;W·M·哈德曼;J·G·奧塞爾
• 申請（專利權）人: 皇家飛利浦電子股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 王健

本發明涉及一種在親和力測定中檢測生物學靶標的方法，所述方法包括以下步驟：提供包含所述生物學靶標的生物學樣品體積；將第一捕獲部分加入包含所述生物學靶標的生物學樣品體積，其中所述第一捕獲部分粘附至顆粒；將捕獲的生物學靶標濃縮為小于步驟a)中的生物學樣品體積的洗脫體積；從所述顆粒切割所述第一捕獲部分或所述生物學靶標以及以夾心或競爭性親和力測定形式直接或間接檢測和/或定量所述生物學靶標，其中所述生物學靶標與至少一種捕獲部分結合，優選與至少兩種捕獲部分結合。

本申請是2011年6月14日提交的題為“多表位測定的中國專利申請201180029393.3的分案申請。

技術領域

本發明涉及親和力測定的領域。具體地，本發明涉及一種在親和力測定中檢測生物學靶標的方法以及生物學靶標的檢測組件。

背景技術

親和力測定是測量溶液中的物質，分析物的存在或濃度的生物化學測試，所述溶液通常包含物質的復雜混合物，例如生物學液體，如血液、唾液、血清或尿。這樣的測定基于給定分子或所述分子的特定部分如抗體以高特異性結合至一種或非常有限組的其他分子的能力。測定的特異性取決于分析物能夠結合至其特異性結合伙伴以排除待分析的樣品中的所有其他物質的程度。

除了需要特異性，必須選擇對分析物具有足夠高親和力的結合伙伴以產生準確和可重復的測量，即可測量信號。在歷史上，這通過測量一些物理特征如光散射的變化或折射率的變化來完成。通過現代儀器，這類方法再次越來越受歡迎。然而，現在的大多數免疫測定依賴于使用分析試劑以結合至分析物，所述分析試劑與可檢測的標記結合(associate)。已證實各種標記，包括用于放射免疫測定的放射性元素；酶；熒光、磷光和化學發光染料；乳膠和磁性顆粒；染料微晶、金、銀和硒膠體顆粒；金屬螯合物；輔酶；電活性基團；寡核苷酸、穩定的自由基、聚合物等。這類標記用于分離游離和結合的標記試劑之后檢測和定量結合事件，或者通過以結合事件影響標記產生的信號的變化這樣的方式設計系統來檢測和定量結合事件。

親和力測定通常探測肽、蛋白、寡核苷酸、寡糖或小分子如適配體與固定的結合伙伴的相互作用。典型的結合伙伴包括蛋白，其可以為受體、酶或抗體，但是還包括多肽和多氨基酸(例如，鎳結合位點的多His標簽、酰胺或Schiff堿連接的多賴氨酸、硫醚連接的多半胱氨酸)。例如，基于固定方案的鏈霉親和素廣泛用于將生物素化的生物學元素連接至測定表面。

例如，親和力測定可以進一步分類為競爭性和非競爭性測定。在競爭性親和力測定中，生物學樣品中的分析物與標記的分析物類似物競爭結合其伙伴。然后測量結合至伙伴的標記的分析物類似物的量。在這種方法中，反應信號與生物學樣品中分析物的濃度成反比。這是因為反應信號越大，樣品中越少分析物可用于與標記的分析物類似物競爭。

在非競爭性親和力測定中，其也稱為“夾心測定”，生物學樣品中的分析物結合至其伙伴，然后標記試劑結合至所述分析物。然后測量位點上標記試劑的量。不像競爭性方法，非競爭性方法即夾心測定的結果直接與生物學樣品中分析物的濃度成比例。這是因為如果生物學樣品中不存在分析物，則標記試劑不會結合。

親和力測定，特別是免疫測定廣泛用作細菌、病毒、內分泌和寄生疾病的診斷工具以及濫用和慢性疾病狀態的檢測藥物，一個實例是可以導致心臟病發作的心臟疾病。

各種技術如放射免疫測定、免疫過氧化物酶和ELISA目前用于親和力測定，特別是免疫測定。然而，放射免疫測定具有需要使用危險和破壞環境的試劑的缺點。

此外，除了特異性，如上文所述，靈敏度對于測定性能是至關重要的。測定的靈敏度可以通過結合事件產生的特異性信號與系統的背景噪聲相比的比例來定義。

降低信噪比(SNR)的因素包括試劑如抗體非特異性結合至測定的各種組分。此外，與測定的試劑如酶底物反應的測定基質的一些內源性組分的活性傾向于產生“假”反應產物，其干擾標記的復合物如標記的抗體-抗原復合物形成的“真正”產物的準確檢測。