[發明專利]一株重組菌及其在催化萊鮑迪甙A生成萊鮑迪甙D中的應用有效
| 申請號： | 201611142783.2 | 申請日： | 2016-12-13 |
| 公開（公告）號： | CN106754595B | 公開（公告）日： | 2019-10-22 |
| 發明（設計）人： | 李艷;周芳芳;陳可泉;嚴明;郝寧;歐陽平凱 | 申請（專利權）人： | 南京工業大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12P19/56;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京匯恒知識產權代理事務所(普通合伙) 32282 | 代理人： | 王月霞 |
| 地址： | 211816 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組菌 萊鮑迪甙 萊鮑迪甙A 重組質粒 催化 糖基轉移酶 基因克隆 蔗糖合酶 粗酶液 構建 位點 馬鈴薯 番茄 葡萄糖 環境友好性 分離純化 化學試劑 宿主細胞 細胞通透 誘導表達 凍干粉 基因 產率 破碎 應用 制作 轉化 | ||
1.一種以萊鮑迪苷A為底物制備萊鮑迪甙D的方法，其特征在于，將重組菌誘導表達后取粗酶液，加入到反應混合物中催化萊鮑迪甙A生成萊鮑迪甙D；
所述重組菌中同時含有番茄來源糖基轉移酶UGTSL2基因和馬鈴薯來源蔗糖合酶StSUS1基因，所述番茄來源糖基轉移酶UGTSL2基因序列如SEQ.NO.1所示，所述馬鈴薯來源蔗糖合酶StSUS1基因序列如SEQ.NO.2所示；所述番茄來源糖基轉移酶UGTSL2基因克隆到pRSFDuet-1的NdeI與XhoI位點之間，構建得到重組質粒pRSFDuet-SL2，然后再將馬鈴薯來源蔗糖合酶StSUS1基因克隆到pRSFDuet-SL2的NcoI和EcoRI位點之間，構建得到重組質粒pRSFDuet-SL2-SUS1，將重組質粒pRSFDuet-SL2-SUS1轉化到宿主細胞中，得到重組菌；
所述重組菌的誘導表達條件為：將重組菌接種到LB培養基中，于37℃、250rpm振蕩培養8h，再將培養菌液按2%接種量接入誘導培養基中，于200rpm，30℃培養2h，待OD600達到0.2時轉20℃誘導培養22h，離心收集菌體；
所述誘導培養基配方為25g/L酵母粉、15g/L胰蛋白胨、10g/L氯化鈉、2g/L葡萄糖、0.1g/L乳糖；
所述LB培養基配方為0.5g/L酵母粉、0.5g/L氯化鈉、1g/L胰蛋白胨、0.05g/L卡納霉素；
所述反應混合物中包括萊鮑迪甙A、蔗糖和磷酸鈉緩沖液；所述反應混合物中萊鮑迪甙A濃度為10g/L，蔗糖濃度為30g/L，粗酶液濃度為8g/L，采用磷酸鈉緩沖液調節pH為7.2；所述反應在30℃、200rpm條件下反應16h。
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