[發(fā)明專利]一種創(chuàng)制耐熱芥藍(lán)種質(zhì)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611139630.2
• 申請(qǐng)日: 2016-12-12
• 公開（公告）號(hào): CN106755070B
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒麗芳;雷建軍;陳長(zhǎng)明;陳國(guó)菊;曹必好
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/82
• 分類號(hào): C12N15/82;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林瑞云

本發(fā)明涉及一種創(chuàng)制耐熱芥藍(lán)種質(zhì)的方法，具體步驟如下：S1. 構(gòu)建含有如SEQ ID NO:1所示MBF1c基因的重組超表達(dá)載體；S2. 將S1得到的重組超表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌，得到重組農(nóng)桿菌；S3. 用重組農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)染芥藍(lán)外植體，經(jīng)培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)化植株，篩選得到耐熱芥藍(lán)。本發(fā)明有益效果在于提供了一種創(chuàng)制耐熱芥藍(lán)種質(zhì)的方法，該方法通過構(gòu)建含有耐熱相關(guān)轉(zhuǎn)錄輔激活因子MBF1c的重組載體，創(chuàng)制出耐熱性增強(qiáng)的種質(zhì)，對(duì)芥藍(lán)新品種的選育有重要價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于芥藍(lán)育種技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種創(chuàng)制耐熱芥藍(lán)種質(zhì)的方法。

背景技術(shù)

芥藍(lán)(Brassica oleracea var.alboglabra Bailey)為十字花科蕓薹屬蔬菜作物，起源于中國(guó)(瓦維洛夫,1935),原產(chǎn)中國(guó)南部(中國(guó)科學(xué)院華南植物研究所,1956)，最早對(duì)芥藍(lán)進(jìn)行分類研究的Bailey (1922)所用的研究材料就來自廣州。芥藍(lán)為華南地區(qū)的特產(chǎn)蔬菜之一，具有色澤翠綠、質(zhì)地脆嫩和營(yíng)養(yǎng)豐富的特征。近年來，已經(jīng)被我國(guó)北方很多地區(qū)引種，并取得了成功，是中國(guó)優(yōu)質(zhì)創(chuàng)匯蔬菜之一。但芥藍(lán)耐高溫的能力比較差，一般都是在秋冬季栽培，早春可以栽培，初夏之際由于溫度比較高，雖然在高溫下也能生長(zhǎng)，但產(chǎn)量低、品質(zhì)變差。如果通過基因工程方法，創(chuàng)制耐熱芥藍(lán)種質(zhì)，進(jìn)而選育出耐高溫的芥藍(lán)新品種，則在高溫條件下也能種植，可大大提高芥藍(lán)栽培的經(jīng)濟(jì)效益。

高溫脅迫是一種常見的非生物脅迫，植物在適應(yīng)高溫的過程中，進(jìn)化出了一套嚴(yán)密的耐高溫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。多蛋白橋接因子1（Multi-protein Bridging Factor 1, MBF1）是一個(gè)高度保守的轉(zhuǎn)錄共激活子，該基因家族中的MBF1c是一個(gè)關(guān)鍵的耐熱性調(diào)節(jié)因子，它在提高植物抗高溫脅迫方面的能力尤為突出，在該基因的控制之下存在著一個(gè)緊密協(xié)調(diào)的熱應(yīng)激反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)，包括海藻糖，水楊酸和乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，因此，可以通過超表達(dá)芥藍(lán)BaMBF1c，創(chuàng)制耐熱的芥藍(lán)種質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種創(chuàng)制耐熱芥藍(lán)的方法，該方法通過構(gòu)建含有BaMBF1c的重組載體，以及芥藍(lán)的遺傳轉(zhuǎn)化，可以獲得耐熱性增強(qiáng)的芥藍(lán)種質(zhì)，對(duì)芥藍(lán)新品種的選育有重要價(jià)值。

本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的。

一種創(chuàng)制耐熱芥藍(lán)種質(zhì)的方法，包括如下步驟：

S1. 構(gòu)建含有如SEQ ID NO:1所示MBF1c基因的重組超表達(dá)載體；

S2. 將S1得到的重組超表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌，得到重組農(nóng)桿菌；

S3. 用重組農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)染芥藍(lán)外植體，經(jīng)培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)化植株，篩選得到耐熱芥藍(lán)。

S1所述MBF1c基因的DNA序列如SEQ ID NO:1所示，開放閱讀框長(zhǎng)(ORF)447bp。

進(jìn)一步地，所述超表達(dá)載體的構(gòu)建方法為：

S11. 利用超表達(dá)引物擴(kuò)增得到MBF1c基因的ORF全長(zhǎng)；

S12. 將S11克隆的片段連接到pBE-GFP載體，制得MBF1c基因的重組超表達(dá)載體。

進(jìn)一步地，所述引物如SEQ ID NO:3~4所示，分別為：

MBF1-yxb –F: CGCGGGCCCGGGATCCATGCCGAGCAGAT；