[發明專利]一種甲氨蝶呤膠乳免疫比濁測定試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201611138882.3
• 申請日: 2016-12-12
• 公開（公告）號: CN108614107A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 張龍平;張躍建;孫衛兵
• 申請（專利權）人: 上海復星長征醫學科學有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/82
• 代理公司: 上海順華專利代理有限責任公司 31203
• 代理人: 陸林輝

一種甲氨蝶呤膠乳免疫比濁測定試劑盒及其制備方法。本發明提供測定人體血清中血藥甲氨蝶呤含量的試劑盒：試劑R1和試劑R2以1:1組成。其重量百分配比為R1：0.01％～4％乳化劑、0.01％～4％甲氨蝶呤共軛物、0.1％～2％氯化鈉、0.05％～2％增敏劑、0.02％防腐劑、30～100mmol/L緩沖液。R2：0.1％～0.5％結合有抗甲氨蝶呤抗體膠乳微粒、0.1％～1.0％牛血清白蛋白、0.02％～2％吐溫20、0.02％～2％穩定劑2、0.02％～2％蛋白保護劑2、0.02％防腐劑、20～50mmol/L緩沖液。本發明試劑盒靈敏度和穩定性高，有較好的臨床應用前景,本發明提供了制備方法。

技術領域

本發明涉及生物試劑，具體涉及檢測試劑盒，尤其涉及一種靈敏度高、特異性強的膠乳免疫比濁法測定人體血清甲氨蝶呤含量的試劑盒及其制備方法。

背景技術

甲氨蝶呤(Methotrexate，MTX)是一種葉酸還原酶抑制劑，為抗葉酸類抗腫瘤藥物，主要通過對二氫葉酸還原酶的抑制作用阻礙腫瘤細胞DNA的合成，從而抑制腫瘤細胞的生長和繁殖。其抗腫瘤機理是：甲氨蝶呤與葉酸結構即為相似，都屬于蝶啶衍生物，故MTX能夠結合到二氫葉酸還原酶的活性位置上，阻斷四氫葉酸的形成。其選擇性地作用于S期(DNA合成期)，屬于細胞周期特異性藥物。臨床上在急性白血病(尤其是急性淋巴細胞性白血病)、絨毛膜上皮癌及惡性葡萄胎等方面的治療效果較好。對頭頸部腫瘤、乳腺癌、肺癌及盆腔腫瘤均有一定療效，也可與其他藥物聯合治療Burkitts淋巴瘤，晚期淋巴肉瘤(Ⅲ和Ⅳ期，Peter氏階段系統)和晚期蕈樣真菌病。

因甲氨蝶呤安全范圍窄，服藥后人體代謝和排泄的個體化差異大，低于其有效血藥濃度則無法抑制腫瘤生長，高于其有效血藥濃度會引起胃腸道反應、肝硬化、腎臟損害等副作用。該藥的細胞毒性較大，不良反應較多，應密切監測患者血藥濃度，做到個體化給藥。因此，對服用甲氨蝶呤的患者進行血藥濃度監測，減少不良反應及指導臨床個體化安全用藥具有重要意義。

目前，測定甲氨蝶呤的方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、熒光偏振免疫分析法(FPIA)等。HPLC法操作繁瑣，主要用于實驗室分析，FPIA法需要配備昂貴的專用儀器，成本較高。因而，這些方法在臨床應用上都具有一定的局限性。雖然已有可應用于生化分析儀的甲氨蝶呤測定試劑盒上市，但遠不能滿足臨床需求。目前市場上仍缺乏穩定性好、靈敏度高、特異性強的甲氨蝶呤檢測試劑，尤其是質量好的自動化檢驗試劑。因此，研發生產質量達到臨床要求、實用性強、性價比高，可應用于全自動生化分析儀的甲氨蝶呤測定試劑已成為國內外體外診斷試劑行業的熱點。

本發明的甲氨蝶呤膠乳免疫比濁測定試劑可以實現在全自動生化分析儀上對甲氨蝶呤的高通量、快速化檢測，且具有操作簡便、靈敏度高、特異性強、結果準確等優點，有效降低甲氨蝶呤檢測成本，有利于臨床推廣使用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于克服上述不足之處，研究設計一種在全自動生化分析儀上對甲氨蝶呤的快速、靈敏、準確檢測的測定試劑及其制備方法。

本發明提供了一種甲氨蝶呤膠乳免疫比濁測定試劑盒。

本發明試劑盒由試劑R1和試劑R2組成。

所述試劑R1和試劑R2的體積比為1:1。

本發明試劑盒所述試劑R1由下列重量百分配比的組分組成：

0.01％～4％的乳化劑、0.01％～4％的甲氨蝶呤共軛物、0.1％～2％氯化鈉、0.05％～2％的增敏劑、0.02％的防腐劑、88.00％～99.80％的30～100mmol/L緩沖液。

所述試劑R1為與抗甲氨蝶呤特異性抗體結合的共軛競爭反應液。

所述試劑R1所述乳化劑選自吐溫20、吐溫80或聚乙二醇辛基苯基醚。