[發(fā)明專利]一種植物組織的顯微觀察方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611138800.5
• 申請日: 2016-12-12
• 公開（公告）號: CN106769298B
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發(fā)明（設計）人: 田世平;陳彤;秦國政;徐勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

本發(fā)明公開了一種植物組織的顯微觀察方法。本發(fā)明提供的植物組織的顯微觀察方法，將固定處理后再使用氫氧化鉀進行消化，再進行透明處理，避免了酶解或其它操作，節(jié)省了成本；透明效果好，與熒光染色和標記操作兼容性好：可通過熒光染色在熒光顯微鏡下清晰地觀測到植物深層組織的內部結構。消化處理結合透明技術對植物深層組織進行顯微觀察的方法為高等植物表型鑒定以及基因表達模式的深入研究奠定了基礎，尤其在植物深層組織結構進行觀察的研究中發(fā)揮重要作用，實際應用價值高。

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域,尤其涉及一種植物組織的顯微觀察方法。

背景技術

隨著功能基因組學、分子生物學研究的不斷深入，特定基因在植物體內的表達部位其在特定發(fā)育時期的功能得到了廣泛關注。熒光顯微觀察和三維成像技術為植物表型分析、植物與病原菌互作以及基因表達模式分析提供了重要工具。與動物細胞相比，植物細胞壁與細胞質折射率不同，而且細胞中含量豐富的色素和芳香類物質使獲取的圖像信噪比降低。因此，以往對植物細胞的顯微觀察僅限于深度大約為30μm左右的幾層細胞，極大地影響了植物細胞結構和功能的解析。

為了觀察植物體更深層的內部結構或亞細胞結構，往往需要經(jīng)過特殊處理，使植物樣品減少厚度及體積，使光線透過樣品才能進行顯微觀察。處理后的材料要求小而薄、完整、透明、保持原結構，又具有顏色容易辨認。為達到上述要求，需要采取不同的制片方法或者在成像之前對植物材料進行透明，以方便觀察組織較厚的植物樣品，例如煙草和番茄葉片、沙蔥葉片等。

發(fā)明內容

本發(fā)明一個目的是提供一種植物組織顯微鏡檢測前處理的方法。

本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟A：

1)將植物組織用固定液固定，得到固定后的植物組織；

2)將所述固定后的植物組織用氫氧化鉀消化，得到消化后的植物組織；

3)將消化后的植物組織用PHEM溶液洗滌，得到洗滌后植物組織；

4)將所述洗滌后植物組織在透明液中浸沒處理，得到透明后的植物組織，實現(xiàn)植物組織顯微鏡檢測前處理；

所述PHEM溶液包括PIPES(對二氮己環(huán)-1,4-二(2-乙磺酸))、HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸)、EGTA和MgCl₂；

所述透明液由尿素、丙三醇、Triton X-100和所述PHEM溶液組成；

上述方法中，

所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩爾的量比為40-80：15-35：5-15：1-3；

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩爾的量比為60：25：15：2；

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩爾的量比為60：25：10：2；

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩爾的量比為40：15：5：1；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為4-8mol：20-40ml：0.05-0.15g；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為6mol：20ml：0.1g；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為6mol：30ml：0.1g；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為4mol：20ml：0.1g。

上述方法中，