[發明專利]一種植物組織的顯微觀察方法

有效

• 申請號: 201611138800.5
• 申請日: 2016-12-12
• 公開（公告）號: CN106769298B
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 田世平;陳彤;秦國政;徐勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

1.一種植物組織顯微鏡檢測前處理的方法，包括如下步驟A：

1）將植物組織用固定液固定，得到固定后的植物組織；

2）將所述固定后的植物組織用氫氧化鉀消化，得到消化后的植物組織；

3）將消化后的植物組織用PHEM溶液洗滌，得到洗滌后植物組織；

4）將所述洗滌后植物組織在透明液中浸沒處理，得到透明后的植物組織，實現植物組織顯微鏡檢測前處理；

所述PHEM溶液包括PIPES、HEPES、EGTA和MgCl_2；

所述透明液由尿素、丙三醇、Triton X-100和所述PHEM溶液組成。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩爾的量比為40-80：15-35：5-15：1-3；

所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為4-8mol：20-40ml：0.05-0.15g。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩爾的量比為60：25：15：2；

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩爾的量比為60：25：10：2；

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl₂的摩爾的量比為40：15：5：1；

所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為6mol：20ml：0.1g；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為6mol：30ml：0.1g；

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為4mol：20ml：0.1g。

4.根據權利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：

所述PHEM溶液由終濃度為40-80 mM PIPES、終濃度為15-35 mM HEPES、終濃度為5-15mM EGTA、終濃度為1-3 mM MgCl₂和水組成；所述透明液由終濃度為4-8 M尿素、體積百分比20-40%丙三醇、質量百分含量0.05-0.15% Triton X-100和PHEM溶液組成。

5.根據權利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述PHEM溶液由終濃度為60 mMPIPES、終濃度為25 mM HEPES、終濃度為15mM EGTA、終濃度為2mM MgCl₂和水組成；

或所述PHEM溶液由終濃度為60 mM PIPES、終濃度為25 mM HEPES、終濃度為10 mMEGTA、終濃度為2 mM MgCl₂和水組成；

或所述PHEM溶液由終濃度為40 mM PIPES、終濃度為15 mM HEPES、終濃度為5 mMEGTA、終濃度為1 mM MgCl₂和水組成；

所述透明液由終濃度為6 M尿素、體積百分比20%丙三醇、體積百分比0.1% Triton X-100和PHEM溶液組成；

或所述透明液由終濃度為6M尿素、體積百分比30%丙三醇、體積百分比0.1% Triton X-100和PHEM溶液組成；

或所述透明液由終濃度為4 M尿素、體積百分比20%丙三醇、體積百分比0.1% TritonX-100和PHEM溶液組成。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述PHEM溶液的pH值為6.9。

7.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述將固定后的植物組織用氫氧化鉀消化的方式為將固定后的植物組織浸在濃度為質量百分比10-15%的氫氧化鉀水溶液中；

所述將消化后的植物組織用PHEM溶液洗滌的方式為將所述消化后的植物組織浸沒在所述PHEM溶液中。