[發明專利]一種基于蛋白質組學分析碳納米管加固蠶絲對蠶絲蛋白氨基酸序列影響的方法

有效

• 申請號: 201611136630.7
• 申請日: 2016-12-12
• 公開（公告）號: CN106596820B
• 公開（公告）日: 2019-01-22
• 發明（設計）人: 彭志勤;古錦翠;王秉;萬軍民;胡智文
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 浙江納祺律師事務所 33257
• 代理人: 鄭滿玉

本發明公開了一種基于蛋白質組學分析碳納米管加固蠶絲對蠶絲蛋白氨基酸序列影響的方法，其向桑葉噴淋含有碳納米管的溶液以供給蠶幼蟲得到加固蠶絲與普通蠶絲利用蛋白質組學方法作對比實驗，實驗過程中采用減法脫膠并加入SDS陰離子表面活性劑提高脫膠效果，使用胰凝乳蛋白酶進行溶液內酶切以完成酶切分離，采用HPLC?MS/MS進行質譜分析，根據所得到的兩組氨基酸序列判斷碳納米管加固蠶絲對蠶絲蛋白氨基酸序列的影響，本發明采用蛋白質組學方法分析碳納米管加固蠶絲對蠶絲蛋白氨基酸序列的影響，一方面，靈敏度高，操作簡單,另一方面，準確度高，樣品使用量少。

技術領域

本發明涉及一種影響蠶絲蛋白氨基酸序列，更具體的說是涉及一種基于蛋白質組學分析碳納米管加固蠶絲對蠶絲蛋白氨基酸序列影響的方法。

背景技術

蠶絲是古代漢族文明產物之一，是熟蠶結繭時分泌絲液凝固而成的連續長纖維，也稱“天然絲”，它與羊毛一樣是人類最早利用的動物纖維之一，蠶絲具有輕，細，柔等優點，但也存在強度低，抗外力破壞性弱等缺點，為了改變蠶絲的這種缺點，許多科研工作者均做了不少研究來加固蠶絲，通過拉曼光譜和電子顯微鏡成像可以知道加固之后的蠶絲晶體結構排列更為有序，各種性能顯著提高，但是是否涉及到蠶絲蛋白氨基酸序列的變化很難做出判斷。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種快速，直觀，簡便的基于蛋白質組學分析碳納米管加固蠶絲對蠶絲蛋白氨基酸序列影響的方法。

為實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：一種基于蛋白質組學分析碳納米管加固蠶絲對蠶絲蛋白氨基酸序列影響的方法，該方法采用如下步驟：

a)選取一份來自同一母體的蠶卵在相同條件下孵育，待蠶破殼長大之后，將其等量隨機分為A，B兩組；

b)在A組蠶幼蟲所食桑葉上噴淋含有碳納米管的水溶液0.5～2.5ml，B組蠶幼蟲所食桑葉不做處理，其他生長條件保持相同；

c)待幼蟲吐絲結繭之后收集兩組蠶絲分別以1:100的浴比在質量分數為0.5％的Na₂CO₃水溶液和質量分數為0.5～1.5％的SDS混合溶液中沸煮30min進行脫膠，共脫膠兩次，1h之后，將溶液和絲素分離，絲素用去離子水沖洗并在50～60℃的烘箱中烘干；

d)將脫膠烘干的絲素纖維放入預先配好的CaCl₂:H₂O:ethanol為1:8:2的混合溶液中，浴比為1：25，加熱到93～97℃蒸煮10～20min，獲得蠶絲溶液，冷卻過濾之后用截留分子量為8000～14000的透析袋透析，透析開始的12h內每隔2h左右換一次水，12h后每隔4h換一次水，24h后每隔8h換一次水，72h后得到絲素蛋白溶液,濃縮處理；

e)取濃縮之后的溶液加入質量分數為1.5～2％的二硫蘇糖醇溶液2～3ml醇于40～50℃下保持15～20min,待冷卻至室溫加入質量分數為2.2～2.8％的碘乙酰胺溶液4～5ml，黑暗環境下保持15～20min后加入50～80ul的胰凝乳蛋白酶溶液,然后用甲酸溶液稀釋；

f)采用HPLC～MS/MS對其進行質譜分析，將結果與氨基酸序列數據庫進行對比，比較A，B兩組實驗結果中的蠶絲蛋白氨基酸序列，B組與氨基酸序列數據庫對比差別不大，分析A組，如果A組中氨基酸序列與B組存在明顯的序列差異說明蠶絲加固對蠶絲蛋白的序列結構有影響，如果A組氨基酸序列與B組無明顯差異說明蠶絲加固與氨基酸序列結構無關。

一種基于蛋白質組學分析碳納米管加固蠶絲對蠶絲蛋白氨基酸序列影響的方法，采用如下步驟：

a)選取一份來自同一母體的蠶卵在相同條件下孵育，待蠶破殼長大之后，將其等量隨機分為A，B兩組；

b)在A組蠶幼蟲所食桑葉上噴淋含有碳納米管的水溶液1.5ml，B組蠶幼蟲所食桑葉不做處理，其他生長條件保持相同；