[發(fā)明專利]一種基于蛋白質(zhì)組學(xué)測定古代牛毛微痕跡的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611136550.1
• 申請日: 2016-12-12
• 公開（公告）號: CN106596970B
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 彭志勤;古錦翠;王秉;萬軍民;胡智文
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江理工大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N27/447;G01N1/28
• 代理公司: 浙江納祺律師事務(wù)所 33257
• 代理人: 鄭滿玉

本發(fā)明公開了一種基于蛋白質(zhì)組學(xué)測定古代牛毛微痕跡的方法，將古代牛毛微痕跡土樣及表土層土樣，生土層土樣提取分離，通過采用二維電泳技術(shù)將蛋白質(zhì)進行有效的分離同時比較三種樣品的電泳結(jié)果，排除土壤中可能含有蛋白質(zhì)的影響以及外界因素的干擾,將電泳結(jié)果中的條帶割下來完成膠內(nèi)酶切，然后進行質(zhì)譜分析，根據(jù)質(zhì)譜分析結(jié)果與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中的氨基酸序列進行比較，即可實現(xiàn)蛋白質(zhì)的鑒定。本發(fā)明采用蛋白質(zhì)組學(xué)方法測定古代牛毛微痕跡，解決了普通分析測試在分析微痕跡殘留物時束手無策的問題，通過蛋白質(zhì)組學(xué)測定，準確的得到樣品中的蛋白種類，判斷微痕跡樣品是否為牛毛微痕跡，一方面靈敏度高，操作簡便，另一方面準確度高，樣品使用量少。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種測定古代牛毛微痕跡的方法，更具體的說是涉及一種基于蛋白質(zhì)組學(xué)測定古代牛毛微痕跡的方法。

背景技術(shù)

牛毛是一種天然動物毛纖維，具有角質(zhì)組織，堅韌并有彈性，可用于生產(chǎn)各種毛織品，是主要的毛紡工業(yè)原料。

中國歷史悠久，從中國早期的墓葬中出土有大量的牛毛制品，這些牛毛及牛毛制品的主要成分是蛋白質(zhì)，長期埋藏在地下環(huán)境中，受到濕、熱和微生物等因素的影響，纖維會發(fā)生不同程度的降解；出土后因環(huán)境條件的劇烈變化，進一步加速了纖維的老化，因此，在漫長的歷史進程中，當年埋入墓葬或遺址中的一些牛毛及其制品早已失去了實體面貌，降解成肽段和氨基酸，或者成為痕跡，或者化入泥土，在肉眼下已經(jīng)無法辨識，且年代越早的證據(jù)越難尋覓，給牛毛類文物的鑒定和保護研究帶來了很大的困難。

目前，普通的分析檢測技術(shù)，如傅里葉紅外光譜，拉曼光譜，X-衍射分析等，在遇到這種微痕跡類殘留物分析時，往往束手無策，國內(nèi)外對于牛毛微痕跡的鑒定，大多數(shù)還停留在對纖維形態(tài)的分析上，所得出的鑒定結(jié)果也沒有十足的準確性；因此，尋找一種更為科學(xué)的手段來鑒定牛毛微痕跡是非常必要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，而提供一種操作簡單，結(jié)果準確的一種基于蛋白質(zhì)組學(xué)測定古代牛毛微痕跡的方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：一種基于蛋白質(zhì)組學(xué)測定古代牛毛微痕跡的方法，該方法采用如下步驟：

(A)稱取古代牛毛微痕跡土樣，表土層土樣和土層土樣各25～30g,用研缽分別研磨三組樣品，標記為A、B、C三組；

(B)配制質(zhì)量分數(shù)為5～7％的過一硫酸氫鉀復(fù)合鹽水溶液3000～5400ml，用飽和氫氧化鈉對該溶液進行調(diào)節(jié)，以使溶液的pH為4～6，等量分為三組備用；

(C)將步驟(A)中的三組樣品均按照1:40～60的浴比分別放入步驟(B)配好的溶液中，然后在30～50℃下攪拌40～50min，三組實驗在相同條件下獨立操作；

(D)對經(jīng)步驟(C)最終得到的三組樣品使用高速冷凍離心機進行離心除去懸浮顆粒，轉(zhuǎn)速控制在4000～5000r/min,溫度為10～30℃，時間為25～30min；

(E)將質(zhì)量分數(shù)為4～6％的亞硫酸氫鈉、質(zhì)量分數(shù)為2～5％的尿素以及質(zhì)量分數(shù)為0.5～1.5％的十二烷基苯磺酸鈉進行混合以形成每組樣品50～100倍質(zhì)量的混合溶液；

(F)將步驟(E)中形成的混合溶液分別加入步驟(D)中離心完成后的三組樣品中，并在90～110℃下反應(yīng)3～5h后完成過濾；

(G)對經(jīng)步驟(F)后的三組樣品使用截留分子量為8000～14000的透析袋透析，透析開始后的前10～12h，每隔1.5～2.5h換一次水，10～12h后每隔6～8h換一次水，70～72h后將得到的液體裝入濃縮管中真空濃縮15～20min備用；