[發明專利]一種通過去熱原純化降纖酶的方法

在審

• 申請號: 201611136474.4
• 申請日: 2016-12-12
• 公開（公告）號: CN106834258A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 劉乃山
• 申請（專利權）人: 青島冠龍生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N9/64
• 分類號: C12N9/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種通過去熱原純化降纖酶的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

（1）將降纖酶干粉用水溶解，依次加入乙醇、乙酸銨、磷酸鉀溶液、乙酸鈣溶液，攪拌，調節pH，攪拌，離心，取上清液；

（2）調節上清液pH，攪拌，加入95%乙醇進行沉淀，虹吸，離心，并用無水乙醇洗滌沉淀脫水，離心，干燥，得去除熱原的降纖酶精品。

2.根據權利要求1 所述的方法，其特征在于，步驟(1) 中所述降纖酶干粉是通過蛇毒干粉的溶解、親和層析、離子交換層析、凝膠過濾純化和冷凍干燥以得到的。

3.根據權利要求1 所述的方法，其特征在于：步驟(1) 中將降纖酶干粉按1:10-30(Kg:L)的比例加入純化水中攪拌溶解。

4.根據權利要求1 所述的方法，其特征在于：步驟(1) 中加入純化水溶解攪拌后，加入等體積的乙醇以及總體積的5％ (L:Kg) 的乙酸銨攪拌。

5.根據權利要求1 所述的方法，其特征在于：步驟(1) 中，按降纖酶干粉1:20-40(Kg:L)的比例加入0.1-0.4mol/L 磷酸鉀溶液，攪拌30分鐘后，再按降纖酶干粉1:20-40(Kg:L)的比例加入0.05-0.3mol/L的乙酸鈣溶液。

6.根據權利要求1 所述的方法，其特征在于：步驟(2) 中用2mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH 至9.0-10.0，攪拌2-3小時；3000rpm離心30分鐘，棄去沉淀物取上清液。

7.根據權利要求1 所述的方法，其特征在于：步驟(2) 中上清液用2mol/L的鹽酸溶液調節pH 至7.5-8.5，加入10倍量(V/V)95％乙醇，沉淀析出，靜置過夜。

8.根據權利要求1 所述的方法，其特征在于：步驟(2) 中虹吸上層廢乙醇，收集沉淀，3000rpm離心30分鐘，沉淀物用無水乙醇脫水，3000rpm離心30分鐘；將沉淀物真空干燥即得降纖酶成品。