[發明專利]蘆薈苷的偶聯物及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201611136272.X
• 申請日: 2016-12-07
• 公開（公告）號: CN108164599A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 郗日沫;鄧川;尹永梅;孟萌;李小剛;龍浩
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;C07K1/107;C07K16/44;C07K16/06
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蘆薈苷的偶聯物及其制備方法與應用。本發明公開了一種通式(1)的蘆薈苷的偶聯物，由蘆薈苷與產生免疫原性的載體物質鑰匙孔藍蛋白(KLH)偶聯構成，其中n為與一個鑰匙孔藍蛋白分子結合的蘆薈苷的分子數，KLH為鑰匙孔藍蛋白，分子量范圍是450KDa～13000KDa。本發明還公開了所述的偶聯物的制備方法，即將蘆薈苷與產生免疫原性的載體物質連接起來，結合為具有誘發動物免疫系統產生抗體的偶聯物。本發明的蘆薈苷的偶聯物通過免疫新西蘭大白兔，制備了效價達到1∶16000的抗血清，其最低檢測限為57.18ng/ml。本發明具有簡便，快捷，特異，準確的特點，為制備蘆薈苷的酶聯免疫檢測試劑盒提供了基礎。

技術領域

本發明涉及一種小分子半抗原的偶聯物及其制備方法與應用，尤其涉及蘆薈苷的偶聯物及其制備方法與應用。

背景技術

本發明涉及的下列名稱適用于整個說明書和權利要求書：

蘆薈苷：中國標準品質檢所產品

KLH：鑰匙孔藍蛋白(Keyhole Limpet Hemocyanin)，Sigma公司產品

冰醋酸：天津光復精細化工研究所產品

高碘酸鈉：北京百靈威(J&K)公司產品

透析袋：北京索萊寶(Solarbio)公司產品

PBS：磷酸緩沖液(Phosphate Buffer Saline)(0.01M，pH＝7.40)

CBS：碳酸鹽緩沖溶液(Carbonate Buffer Saline)(0.05M，pH＝9.6)。

蘆薈苷(Aloin)，又稱蘆薈甙、蘆薈素，是蘆薈的主要活性成分之一。蘆薈苷主要存在于蘆薈葉皮內表面，是蘆薈諸多功能的重要活性物質，具有健胃、通便利尿、養顏排毒、殺菌、抑制腫瘤等作用。蘆薈及其制品在醫藥、美容、保健、食品等領域有廣泛研究應用，蘆薈產業已形成一個欣欣向榮的產業呈現在世人面前。

現今國家已正式將蘆薈列入保健食品原料可利用的中藥名單中，蘆薈原料的安全評價列為食品安全專項研究課題中。蘆薈安全食用量，取決于其制品中蘆薈苷的含量。然而，蘆薈品種、葉齡、采收時間、加工方式的不同，導致其制品中蘆薈苷含量亦不同。一般情況下，藥典蘆薈干制品中蘆薈苷含量為15％～25％左右，植物全葉及葉皮粉中為0.3％～1％左右，蘆薈原汁中為0.005％。我國藥典推薦中藥蘆薈干制品日服用量為2～5克，即蘆薈苷含量為300～1250mg，美國草藥協會植物藥材安全手冊推薦蘆薈苷每日服用量為10～30mg，不超過10天，并提示蘆薈苷1000mg服用超過1～2天，可導致結腸穿孔，血性腹瀉及腎炎。因此，以蘆薈苷為指標性成分對蘆薈及其制品進行相關質量檢測和鑒定分析有著重要的意義。

目前，蘆薈苷常用的測定方法有高效液相法、質譜法、毛細管電泳法和熒光分光光度法等，這些定量分析方法操作繁雜，專屬性不強，儀器價格昂貴，費事較長，且造成有機溶劑污染，需要專門的技術人員，所以難于應用于現場操作。酶聯免疫檢測法(ELISA)提供了一種極好的檢測手段。該方法具有快速，準確，簡易，不需要專人操作等優點，這使得ELISA法成為一種理想的檢測手段。酶聯免疫檢測法的核心是需要高質量的抗體。蘆薈苷是一種小分子有機化合物，不具有免疫原性，稱之半抗原。所以，必須把蘆薈苷轉化為能引發動物免疫系統產生抗體的免疫原(又稱之為完全抗原)。經檢索，世界上尚未有關于蘆薈苷的免疫原合成及抗體制備過程的報道，不能滿足檢測需要，因此研究蘆薈苷的免疫原的合成顯得格外重要。

發明內容

針對上述現有技術的不足，本發明要解決的問題是：提供一種能引發動物免疫系統產生針對蘆薈苷有特異反應的抗體的免疫原，即蘆薈苷的偶聯物及其制備方法。同時，本發明還提供了所述的蘆薈苷的偶聯物作為免疫原在制備蘆薈苷特異反應抗體中的應用。