[發明專利]SPOP及突變體表達的C4-2穩定細胞系及構建方法

在審

• 申請號: 201611133369.5
• 申請日: 2016-12-10
• 公開（公告）號: CN108220242A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 樸海龍;顏敏
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N15/66
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發明涉及生物醫學研究領域，建立了SPOP及其突變體高表達的前列腺癌C4?2細胞系。通過引物合成，PCR反應，酶切反應，將SPOP野生型及其突變體1和突變體2基因分別成功連接到了Ploc.rfp載體上。通過酶切反應和測序驗證了質粒的正確性。接下來，我們通過在HEK293T細胞中構建慢病毒的方法，收集含有慢病毒的細胞培養液，用于前列腺癌C4?2細胞的感染。經過12?16天8?12μg/mL的blasticidin篩選，得到SPOP野生型及其突變體1和突變體2高表達的C4?2細胞系。本專利為研究前列腺癌SPOP突變所造成的代謝紊亂提供了研究體系。

技術領域

本發明涉及生物醫學領域，具體涉及一種構建SPOP野生型及其突變體表達的C4-2穩定細胞系及其構建方法。

背景技術

SPOP是目前已知的前列腺癌突變率最高的基因。SPOP蛋白分子量大小為42kDa。在約6-15％的前列腺癌病人中都存在突變¹。SPOP蛋白是一種E3泛素化連接酶，可以介導一些蛋白的泛素化降解。在前列腺癌中，SPOP突變位點主要集中在底物結合MATH域，其突變會導致原本通過與其結合泛素化降解的蛋白不再能夠被泛素化降解，從而導致癌蛋白在細胞內累計。目前已經報道的SPOP底物有AR²、ERG^3,4、PTEN⁵、DEK⁶等。研究發現，在前列腺癌中，敲除SPOP基因會導致前列腺癌細胞侵襲性增加。

前列腺癌是發病率最高的男性癌癥。目前為止，對其機理研究的還不是很透徹，SPOP突變到底會在前列腺癌中引起怎樣的變化，目前的認識還是比較少的。我們在前列腺癌細胞C4-2中構建的SPOP及其突變體高表達細胞系有助于研究SPOP突變對前列腺癌發生發展所產生的影響。

參考文獻

1 Barbieri,C.E.et al.Exome sequencing identifies recurrent SPOP,FOXA1and MED12mutations in prostate cancer.Nat Genet44,685-689,doi:10.1038/ng.2279(2012).

2 An,J.,Wang,C.,Deng,Y.,Yu,L.&Huang,H.Destruction of full-lengthandrogen receptor by wild-type SPOP,but notprostate-cancer-associatedmutants.Cell reports6,657-669,doi:10.1016/j.celrep.2014.01.013(2014).

3 An,J.et al.Truncated ERG Oncoproteins from TMPRSS2-ERG Fusions AreResistant to SPOP-Mediated Proteasome Degradation.Molecular cell59,904-916,doi:10.1016/j.molcel.2015.07.025(2015).

4 Gan,W.et al.SPOP Promotes Ubiquitination and Degradation of the ERGOncoprotein to Suppress Prostate Cancer Progression.Molecular cell59,917-930,doi:10.1016/j.molcel.2015.07.026(2015).

5 Li,G.et al.SPOP promotes tumorigenesis by acting as a keyregulatory hub in kidney cancer.Cancer Cell25,455-468,doi:10.1016/j.ccr.2014.02.007(2014).