[發明專利]一種納米技術在羊胚胎提取中的應用以及羊胚胎素的質量標準

在審

• 申請號: 201611130743.6
• 申請日: 2016-12-09
• 公開（公告）號: CN106727711A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 李大旺
• 申請（專利權）人: 深圳市昌雋生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/54
• 分類號: A61K35/54;A61P37/04;A61P39/00;G01N21/78;G01N30/02;G01N33/50
• 代理公司: 合肥市科融知識產權代理事務所(普通合伙)34126
• 代理人: 宣圣義

技術領域

本發明涉及納米技術領域，具體為一種納米技術在羊胚胎提取中的應用以及羊胚胎素的質量標準。

背景技術

自1912年，瑞士科學家卡爾教授首次發現羊胚胎細胞中有一種能使細胞恢復活力的物質(稱之為羊胚胎素)以來。羊胚胎中含有活化細胞、增強生命系統免疫功能、恢復人體精力的多種物質，這些物質對人類抗衰老、治療和預防疾病得到了應用。隨著人類對羊胚胎素用研究深入，羊胚胎素的提取與純化技術，對羊胚胎素在人類應用中起決定性作用。具有高生物活性小分子羊胚胎素能快速被人體吸收利用，且安全、效果明顯，它通過增強人體免疫功能，調節人體內分泌，加速細胞的分裂，修復受細胞，活化衰老細胞，使人體各細胞及組織達到年輕狀態，人體各機能均被激活，達到真正意義上的延緩衰老，治療和預防疾病。羊胚胎素包括細胞中含有蛋白質、核酸、糖類、磷脂類、維生素、酶等。按常規方法提取的羊胚胎素中的大分子物質多，成分復雜，過敏性高，活性低、生物利用率低。

羊胚胎素的生物活性高低和分子的大小能決定羊胚胎素是否可以達到上述效果。目前的提取方法主要以粉碎、生化提取、離心、微濾，整個生產過程中受熱量和化學物質的影響，特別是細胞破碎后沒有對生物活性物質保護，生物活性受到破壞較大，因此提取物中羊胚胎素的活性較低，其次在純化時采用微濾，成分復雜，不易吸收，過敏源多，再提取出來的羊胚胎素無質量標準，不能保證其質量。

發明內容

本發明的目的在于提供一種納米技術在羊胚胎提取中的應用以及羊胚胎素的質量標準，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

1.一種從羊胚胎中制備羊胚胎提取液的方法，從羊胚胎的選取及處理開始，經過組織破碎、細胞反復凍融、離心去雜、微濾，獲得羊胚胎提取液，包括下述步驟：

(1)羊胚胎選取與處理：其羊胚胎為孕期6-8周，脫母體后浸泡在生理鹽水中，30min內置-20℃儲藏；

(2)組織破碎：去除羊胚胎腸胃雜質，碎成碎片，絞肉機2次后用4-6℃生理鹽水制成肉漿，再用膠體磨研磨4次；

(3)細胞反復凍融：在-35±2℃和0℃反復凍融三次，每35±2℃時間凍融時間為12小時；

(4)離心去雜：采用冷凍離心機，確保離心室溫度在-8—-10℃；

(5)微濾：離心上清液經濾紙過濾后，再經0.8um、0.2um過濾，得羊胚胎提取液。

作為本發明更進一步的技術方案，步驟(2)中所述生理鹽水與羊胚胎重量比例為15：1。

2.一種從羊胚胎提取液中分離純化得到羊胚胎素溶液的制備方法，通過不同納米遞度過濾，獲得羊胚胎素溶液，包括下述步驟：

(1)納濾：經過微濾后的羊胚胎提取液，在無菌條件下采用不同納米遞度過濾，去掉分子量大于6000道爾頓的物質(高分子物質、細菌、病毒等)和分子量小于100道爾頓物質(無機鹽類等)；

(2)納濾后的處理：納濾后的溶液充氮后密封保存，確保儲藏期因氧化導致生物活性降低，同時回收100道爾頓以下的液體循環利用，減少排放達到環保。

作為本發明更進一步的技術方案，在無菌條件下指的是B級潔凈區內。

作為本發明更進一步的技術方案，不同納米遞度為10—100nm。

3.一種羊胚胎素溶液的質量標準，具體為：

性狀：本品為無色或微黃色液體。

鑒別：取本品，加40％氫氧化鈉溶液0.5ml，搖勻，再加1％硫酸銅溶液1ml,溶液顯紫紅色。

PH值：6.0～7.5；

蛋白質：取本品2ml，加20％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，不得發生混濁或沉淀；

多肽含量：不得低于6mg/ml；

高分子物質：不得高于5.0％；

生物活性：不得低于30.0％；

貯藏：充氮密閉，-4℃以下保存；

有效期：24個月。

作為本發明更進一步的技術方案，多肽含量的測定方法為福林酚測定法。

作為本發明更進一步的技術方案，高分子物質的測定方法為高效液相色譜法。

作為本發明更進一步的技術方案，生物活性的測定方法為T細胞活性測定法-脫E受體法。

與現有技術相比，本發明提供了一種羊胚胎提取和純化方法，解決了羊胚胎素中高分子物質多、成分雜、過敏源多、生物活性低的原因。同時本發明建立了羊胚胎素溶液質量標準，解決了羊胚胎提取后無標準檢測的問題。