[發明專利]一種納米技術在羊胚胎提取中的應用以及羊胚胎素的質量標準

在審

• 申請號: 201611130743.6
• 申請日: 2016-12-09
• 公開（公告）號: CN106727711A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 李大旺
• 申請（專利權）人: 深圳市昌雋生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/54
• 分類號: A61K35/54;A61P37/04;A61P39/00;G01N21/78;G01N30/02;G01N33/50
• 代理公司: 合肥市科融知識產權代理事務所(普通合伙)34126
• 代理人: 宣圣義

1.一種從羊胚胎中制備羊胚胎提取液的方法，其特征在于，從羊胚胎的選取及處理開始，經過組織破碎、細胞反復凍融、離心去雜、微濾，獲得羊胚胎提取液，包括下述步驟：

(1)羊胚胎選取與處理：其羊胚胎為孕期6-8周，脫母體后浸泡在生理鹽水中，30min內置-20℃儲藏；

(2)組織破碎：去除羊胚胎腸胃雜質，碎成碎片，絞肉機2次后用4-6℃生理鹽水制成肉漿，再用膠體磨研磨4次；

(3)細胞反復凍融：在-35±2℃和0℃反復凍融三次，每35±2℃時間凍融時間為12小時；

(4)離心去雜：采用冷凍離心機，確保離心室溫度在-8—-10℃；

(5)微濾：離心上清液經濾紙過濾后，再經0.8um、0.2um過濾，得羊胚胎提取液。

2.根據權利要求1所述的從羊胚胎中制備羊胚胎提取液的方法，其特征在于，步驟(2)中所述生理鹽水與羊胚胎重量比例為15：1。

3.一種從羊胚胎提取液中分離純化得到羊胚胎素溶液的制備方法，其特征在于，通過不同納米遞度過濾，獲得羊胚胎素溶液，包括下述步驟：

(1)納濾：經過微濾后的羊胚胎提取液，在無菌條件下采用不同納米遞度過濾，去掉分子量大于6000道爾頓的物質和分子量小于100道爾頓物質；

(2)納濾后的處理：納濾后的溶液充氮后密封保存，確保儲藏期因氧化導致生物活性降低，同時回收100道爾頓以下的液體循環利用，減少排放達到環保。

4.根據權利要求3所述的從羊胚胎提取液中分離純化得到羊胚胎素溶液的制備方法，其特征在于，所述的在無菌條件下指的是B級潔凈區內。

5.根據權利要求3所述的從羊胚胎提取液中分離純化得到羊胚胎素溶液的制備方法，其特征在于，所述的不同納米遞度為10—100nm。

6.一種羊胚胎素溶液的質量標準，其特征在于：

性狀：本品為無色或微黃色液體。

鑒別：取本品，加40％氫氧化鈉溶液0.5ml，搖勻，再加1％硫酸銅溶液1ml,溶液顯紫紅色；

PH值：6.0～7.5；

蛋白質：取本品2ml，加20％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，不得發生混濁或沉淀；

多肽含量：不得低于6mg/ml；

高分子物質：不得高于5.0％；

生物活性：不得低于30.0％；

貯藏：充氮密閉，-4℃以下保存；

有效期：24個月。

7.根據權利要求6所述的羊胚胎素溶液的質量標準,其特征在于，所述多肽含量的測定方法為福林酚測定法。

8.根據權利要求6所述的羊胚胎素溶液的質量標準,其特征在于，所述高分子物質的測定方法為高效液相色譜法。

9.根據權利要求6所述的羊胚胎素溶液的質量標準,其特征在于，所述生物活性的測定方法為T細胞活性測定法-脫E受體法。