[發明專利]一種輔助鑒定大豆百粒重性狀的分子標記HNUSOY05及其應用

有效

• 申請號: 201611128420.3
• 申請日: 2016-12-09
• 公開（公告）號: CN106755368B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 束永俊;趙金月;李巍;劉贏
• 申請（專利權）人: 哈爾濱師范大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

1.一種輔助鑒定大豆百粒重性狀的分子標記HNUSOY05，其特征在于，所述分子標記核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的大豆表現為高百粒重；缺失SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的大豆表現為低百粒重；所述高百粒重是指籽粒的百粒重≥20.0克；所述低百粒重是指籽粒百粒重≤12.0克。

2.權利要求1所述分子標記HNUSOY05在大豆百粒重性狀遺傳育種、大豆百粒重性狀輔助鑒定、大豆百粒重性狀篩選中的應用。

3.一種權利要求1所述分子標記HNUSOY05的引物對，其特征在于，所述引物對的上游引物HNUSOY05F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物HNUSOY05R的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。

4.權利要求3所述分子標記HNUSOY05的引物對在大豆百粒重性狀遺傳育種、大豆百粒重性狀輔助鑒定、大豆百粒重性狀篩選中的應用。

5.一種利用權利要求3所述分子標記HNUSOY05的引物對鑒定大豆百粒重性狀的方法，其特征在于，以待測大豆基因組DNA為模板，利用權利要求3所述分子標記HNUSOY05的引物對進行PCR擴增；擴增產物采用瓊脂糖凝膠電泳檢測；若檢測得到長度為637 bp的單一片段，則待測大豆品種具有高百粒重性狀；若檢測得到長度為446 bp的單一片段，則待測大豆品種具有低百粒重性狀；所述高百粒重是指籽粒的百粒重≥20.0克；所述低百粒重是指籽粒百粒重≤12.0克。

6.根據權利要求5所述方法，其特征在于，具體步驟如下：

1)提取待檢測大豆樣品中的基因組DNA；

2)以步驟1）所得的待檢測大豆樣品基因組DNA為模板，利用權利要求3所述的分子標記HNUSOY05的引物對進行PCR擴增反應，獲得PCR產物；每25μL所述PCR反應體系包含2.5mmol/L MgCl₂、1 U rTaq酶、800 μmol/L dNTP、0.2 μmol/L 上游引物HNUSOY05F和下游引物HNUSOY05R、50 ng模板基因組DNA；

3)利用步驟2）所得PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳；若檢測得到長度為637 bp的單一片段，則待測大豆品種具有高百粒重性狀；若檢測得到長度為446 bp的單一片段，則待測大豆品種具有低百粒重性狀。

7.根據權利要求6所述方法，其特征在于，步驟2）所述PCR擴增反應為降落PCR擴增反應。

8.根據權利要求7所述方法，其特征在于，所述降落PCR擴增反應的程序為94℃預變性7min；94℃變性20 s，60℃退火20 s，每個循環降0.5℃，72℃延伸30 s，30個循環；94℃變性20 s，45℃退火20 s，72℃延伸30 s，10個循環；72℃終延伸7 min。