[發(fā)明專利]一種載miRNA復(fù)合納米顆粒及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611127159.5
• 申請日: 2016-12-09
• 公開（公告）號: CN108210482B
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬軼凡;蔡林濤;劉蘭蘭;何華美
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院深圳先進技術(shù)研究院
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K9/107;A61K31/7088;A61K47/34;A61K47/54;A61K47/69;A61K47/60;A61K47/10;A61P35/00
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 范盈

本發(fā)明公開了一種載miRNA復(fù)合納米顆粒，其包括陽離子靶向膜材、酸敏膜材以及至少一種miRNA；陽離子靶向膜材選自半乳糖?聚賴氨酸?聚半胱氨酸聚合物、酸敏膜材選自側(cè)鏈經(jīng)過3,4,5,6?四氫苯酐配體進行修飾的聚乙二醇?聚賴氨酸聚合物；miRNA選自誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)巨噬細胞向M1型巨噬細胞分化的miRNA。本發(fā)明的載miRNA復(fù)合納米顆粒通過pH值靶向和主動靶向?qū)崿F(xiàn)對腫瘤相關(guān)巨噬細胞的精準投遞，并實現(xiàn)了促進腫瘤相關(guān)巨噬細胞向M1型巨噬細胞分化的功能。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種靶向傳遞載體。

背景技術(shù)

巨噬細胞作為一類重要的免疫細胞可分為經(jīng)典活化的M1型和替代活化的M2型。其中M1型巨噬細胞是一類重要的效應(yīng)細胞，不但可分泌大量促炎性細胞因子(IL-12、IL-23等)和活性氧中間產(chǎn)物，而且還具有強大的殺傷微生物和腫瘤細胞的能力。與之相反，M2型則主要分泌IL-10等抑炎性細胞因子、多種趨化因子和生長因子，具有抑制免疫反應(yīng)和炎癥，以及促進組織修復(fù)等作用。腫瘤相關(guān)巨噬細胞(TAMs)則由外周單核細胞在腫瘤微環(huán)境中各類細胞因子、生長因子、低氧等因素調(diào)控下分化而成。其細胞表型主要為M2型，在腫瘤細胞免疫逃逸/免疫抑制、腫瘤轉(zhuǎn)移、血管生成等多個過程中扮演重要角色。

微小RNA(miRNA)是一類內(nèi)生的，長度約為20-40個核苷酸的小RNA。它們不但在不同的物種中呈現(xiàn)高度的保守性和同源性，而且每個miRNA可同時調(diào)控多個靶基因，因而是一種具有廣闊應(yīng)用前景的基因調(diào)控手段。研究表明,TAM的分化與miRNA的表達水平密切相關(guān)。例如，miRNA-125a選擇性地表達在M1型巨噬細胞中，miRNA-193b則在M2a型細胞中顯著上調(diào)，而M2b型巨噬細胞則表現(xiàn)為miR-27a,miR-132,和miR-222的高表達。雷宇等利用miRNA基因芯片技術(shù)比較小鼠TAM和正常小鼠腹腔巨噬細胞的miRNA表達水平，發(fā)現(xiàn)有59個miRNA在TAM中的表達水平發(fā)生顯著變化。更重要的是，調(diào)控巨噬細胞的miRNA表達譜可誘導(dǎo)其向M1型分化。例如，過表達miRNA-125a,miRNA-29b,或miRNA-155可誘導(dǎo)巨噬細胞分泌M1型特征細胞因子，抑制巨噬細胞中的miRNA-223則可顯著增強TLR誘導(dǎo)的IL-1和IL-6水平。中山大學(xué)鄭利民等發(fā)現(xiàn)在TAM中過表達miRNA-155能顯著降低腫瘤上清誘導(dǎo)的促炎性因子分子水平。這些結(jié)果表明，調(diào)控miRNA表達水平是誘導(dǎo)TAM向M1型巨噬細胞轉(zhuǎn)化的重要手段。然而遺憾的是，由于RNA在體內(nèi)的穩(wěn)定性差，其臨床應(yīng)用面臨重大挑戰(zhàn)。此外，一個miRNA可同時調(diào)控多個基因，因此如何將miRNA靶向遞送至TAM，避免“脫靶效應(yīng)”，對未來的臨床應(yīng)用尤為重要。

隨著納米技術(shù)的發(fā)展，基于納米材料的新型非病毒載體系統(tǒng)為miRNA靶向遞送提供了新的思路。中科大的王均研究組采用一種基于磷脂-魚精蛋白-透明質(zhì)酸(LRH)的殼核結(jié)構(gòu)納米顆粒負載miR-296反義寡核苷酸鏈，并通過表面修飾cRGD多肽將其靶向遞送至腫瘤新生血管內(nèi)皮細胞。結(jié)果表明，具有靶向修飾的LRH納米顆粒可顯著抑制血管內(nèi)皮細胞的遷移和新生血管的形成。Saltzman等采用穿膜肽修飾的PLGA納米顆粒anti-miRNA負載寡核苷酸類似物PMO和肽核酸(PNA)，結(jié)果顯示納米顆粒不但有效地增強人口腔上皮癌KB細胞對寡核苷酸類似物的攝取，而且能有效地阻斷胞內(nèi)miRNA-155(一種促癌miRNA)的活性。為此，Nature雜志專門指出：“基于納米材料的非病毒載體是實現(xiàn)體內(nèi)miRNA靶向遞送的重要手段。”

公開號CN102512683A公開了一種高分子基因藥物載體及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，該方案是使用環(huán)糊精羥丙基環(huán)糊精作為載體骨架，低分子量聚乙烯亞胺作為載體支鏈，葉酸作為可以靶向腫瘤的功能基團，形成具有靶向腫瘤功能的高效低毒藥物載體。運用此基因藥物載體運載能夠抑制腫瘤血管內(nèi)皮生長因子生成的siRNA進入腫瘤細胞，從而抑制腫瘤生長。該發(fā)明雖然利用了帶正電荷的納米顆粒負載siRNA，但是其以葉酸作為靶向基團，能夠促進siRNA進入腫瘤細胞，但是該方案只用于基因治療，不能用于納米載體介導(dǎo)的免疫治療。