[發明專利]一種褐藻寡糖單體的制備方法及褐藻寡糖

有效

• 申請號: 201611126053.3
• 申請日: 2016-12-08
• 公開（公告）號: CN106755188B
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 李莉莉;秦松;翟詩翔;劉正一;焦緒棟
• 申請（專利權）人: 中國科學院煙臺海岸帶研究所
• 主分類號: C12P19/12
• 分類號: C12P19/12;C12P19/04;C12P19/00;C07H3/04;C07H3/06;C12R1/07
• 代理公司: 深圳市科進知識產權代理事務所(普通合伙) 44316
• 代理人: 趙勍毅

1.一種褐藻寡糖單體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

采用酶解法降解褐藻或褐藻膠得到酶解液；及

將所述酶解液分離純化得到所述褐藻寡糖單體；

所述褐藻寡糖單體包括甘露糖醛酸二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖中的一種；

采用酶解法降解褐藻或褐藻膠得到酶解液，包括下述步驟：

步驟110：將室溫狀態下的嗜糖芽孢桿菌YIC-Alg3接種于海水培養基中，于25-35℃溫度條件培養10-24h，得到活化液；

步驟120：取適量的所述活化液接種于Alg培養基中，培養20-30h，得到發酵液；

步驟130：將所述發酵液離心處理，取上清液加入硫酸銨至所述硫酸銨的飽和度為75％-85％，靜置12-24h后再恒溫離心處理，獲取沉淀物；

步驟140：將所述沉淀物用磷酸鹽緩沖液充分溶解后，于0-4℃溫度條件下離心處理，得到的上清液即為粗酶液；

步驟150：將所述粗酶液添加于褐藻漿液或褐藻膠溶液中，并于30-45℃搖床內酶解20-30h后再離心處理，取上清液，得到所述酶解液；

步驟110中，所述嗜糖芽孢桿菌YIC-Alg3的保藏單位名稱為中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏日期為2016年03月02日，保藏號為CGMCC NO12155；

步驟110中，所述海水培養基的配方為：酵母粉5g、蛋白胨10g、海水1000ml、pH7.2-7.4；

步驟120中，所述Alg培養基的配方為：海藻酸鈉5g、硫酸氨5g、硫酸鎂1g、磷酸氫二鉀2g、去離子水1000ml，pH 7.2-7.4；

步驟140中，所述磷酸鹽緩沖液的pH值為7.2-7.4；

步驟S150中，向褐藻漿液或褐藻膠溶液中添加的粗酶液體積分數為2.5-7.5％。

2.如權利要求1所述的褐藻寡糖單體的制備方法，其特征在于，將所述酶解液分離純化得到所述褐藻寡糖單體，包括下述步驟：

步驟210：在所述酶解液加入稀鹽酸，使所述酶解液沉淀出古羅糖醛酸及其聚合物；

步驟220：對上述混合物離心處理，去除古羅糖醛酸及其聚合物，并收集上清液；

步驟230：在所述上清液中，加入乙醇，使得到的混合物中醇體積分數濃度為70％-80％，沉淀、離心后取上清，再冷凍干燥，得到甘露糖醛酸及其聚合物的粗提物；

步驟240：將所述甘露糖醛酸及其聚合物的粗提物用純水溶解后，上樣Bio-gelP6柱，并用碳酸氫銨溶液洗脫，收集第一洗脫液；

步驟250：將所述第一洗脫液上樣Bio-gel P6柱，以碳酸氫銨溶液洗脫，收集第二洗脫液得到所述褐藻寡糖單體。

3.如權利要求2所述的褐藻寡糖單體的制備方法，其特征在于，在完成步驟240之后，進行步驟250之前，還包括下述步驟：

選取所述第一洗脫液中TLC檢測后寡糖組分相同的樣本，匯集，濃縮。

4.如權利要求2所述的褐藻寡糖單體的制備方法，其特征在于，步驟250中，所述碳酸氫銨溶液的濃度為0.4-0.6mol/L。

5.一種褐藻寡糖，其特征在于，包括權利要求1-4任一項所述的褐藻寡糖單體。