[發明專利]塵螨變應原速崩型舌下片劑疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 201611125986.0
• 申請日: 2016-12-09
• 公開（公告）號: CN108607096A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 裴瀟竹;白彩明;馬曉暉
• 申請（專利權）人: 北京新華聯協和藥業有限責任公司
• 主分類號: A61K39/35
• 分類號: A61K39/35;A61K9/20;A61K47/26;A61K47/18;A61P37/08;A61P11/02;A61P11/06
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1.一種塵螨變應原速崩型舌下片劑疫苗，其特征在于采用直接凍干法制片的塵螨變應原快速崩解舌下片劑，其中含有塵螨變應原和相應的賦形劑、矯味劑、色素等，其中塵螨變應原為戶塵螨(Dermatophagoides pteronyssinus)變應原或粉塵螨(Dermatophagoidesfarinae)變應原或兩者的混合塵螨變應原。

2.根據權利要求1所述塵螨變應原速崩型舌下片劑疫苗，其特征在于：戶塵螨變應原的總生物活性為1～20000AU/片，粉塵螨變應原的總生物活性為1～20000AU/片，混合塵螨變應原原液的總生物活性為1～20000AU/片。

3.如權利要求1所述的舌下片疫苗，其特征在于：每片舌下片中，甘露醇的含量為0～100mg，阿司帕坦的含量為0～10mg，色素的含量為0～0.5mg，制備時采用的磷酸鹽緩沖液的濃度為2mM～200mM。

4.如權利要求1所述的舌下片疫苗，其特征在于：將戶塵螨變應原原液或粉塵螨變應原原液、或混合塵螨變應原原液用磷酸鹽緩沖液稀配至所需濃度，加入甘露醇、阿司帕坦、色素，維持pH7.0-8.0，攪拌均勻，加入鋁制泡罩板中直接入箱凍干制得。

5.根據權利要求2所述的戶塵螨變應原原液，采用下述步驟制備：

1)通過機械震蕩法收集戶塵螨純螨體，然后使用40～100目網篩除去雜質，并對所收集戶塵螨螨體進行純度檢測，形態學與分子生物學鑒定。

2)將1)所得到的戶塵螨螨體以體積比1:5加入無水乙醇，在室溫間斷攪拌下脫脂，每次3h,脫脂至上清無色，將脫脂后的固體物自然干燥至無乙醇味。

3)將脫脂后的戶塵螨螨體1000g以投料比1:25(W:V)加入25000ml 200mM pH8.0磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液，4℃攪拌24h。

4)將提取后的提取液，6000rpm、4℃離心15min，取上清8000rpm、4℃離心30min后取上清。

5)將提取結束后的提取液用8μm濾膜澄清過濾，再將粗提液經0.45μm、0.22μm濾膜依次過濾。

6)將5)過濾后的提取液，用5KD超濾膜衡濾，直到濾出液上清為無色或濾出液的電導與超濾用緩沖液一致，將提取液超濾濃縮到原體積1/5，用免疫熒光法測定原液活性不低于50000AU/ml。

6.根據權利要求2所述的粉塵螨變應原原液，采用下述步驟制備：

1)通過機械震蕩法收集粉塵螨純螨體，然后使用40～100目網篩除去雜質，并對所收集粉塵螨螨體進行純度檢測，形態學與分子生物學鑒定。

2)將1)所得到的粉塵螨螨體以體積比1:5加入無水乙醇，在室溫間斷攪拌下脫脂，每次3h,脫脂至上清無色，將脫脂后的固體物自然干燥至無乙醇味。

3)將脫脂后的戶塵螨螨體1000g以投料比1:25(W:V)加入25000ml 200mM pH8.0磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液，4℃攪拌24h。

4)將提取后的提取液，6000rpm、4℃離心15min，取上清8000rpm、4℃離心30min后取上清。

5)將提取結束后的提取液用8μm濾膜澄清過濾，再將粗提液經0.45μm、0.22μm濾膜依次過濾。

6)將5)過濾后的提取液，用5KD超濾膜衡濾至濾出液上清為無色或濾出液的電導與超濾用緩沖液一致，將提取液超濾濃縮到原體積1/5，用免疫熒光法測定原液活性不低于50000AU/ml。

7.根據權利要求2所述的混合塵螨變應原原液，采用下述步驟制備：

1)將權利要求2所述戶塵螨變應原原液和粉塵螨變應原原液按1：5～5：1的比例混合。

2)將1)獲得的混合原液用免疫熒光法測定原液活性，其活性不低于50000AU/ml。

8.根據權利要求4所述的舌下片疫苗，采用直接凍干法制得，其凍干參數如下：

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