[發(fā)明專利]克拉霉素半抗原、人工抗原和抗體及其制備方法應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611125939.6
• 申請日: 2016-12-09
• 公開（公告）號: CN106589024B
• 公開（公告）日: 2019-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 寧波;李隆軍;劉明如;賴啟隆;朱永利;蔣永青;吳育春
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市綠詩源生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/00;C07K14/765;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/53;G01N33/577
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44295
• 代理人: 王海曼

1.一種克拉霉素半抗原，其特征在于，所述結(jié)構(gòu)如式I所示：

2.制備權(quán)利要求1所述克拉霉素半抗原的方法，其特征在于，依次包括下述步驟：

1)稱取克拉霉素置于反應(yīng)瓶，加入有機(jī)溶劑使其溶解，再稱取丁二酸酐置于反應(yīng)瓶，再向反應(yīng)瓶加入三乙胺，在室溫下，磁力攪拌反應(yīng)3～5小時；

2)將反應(yīng)后的產(chǎn)物減壓旋蒸，濃縮，加入去離子水，調(diào)節(jié)pH為4.5-5.5，析出灰白色固體，過濾，取濾餅，用混合溶劑15ml結(jié)晶，過濾，干燥，得到產(chǎn)物；

其中：所述的克拉霉素和丁二酸酐摩爾比1:1.0～1.5。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的克拉霉素半抗原的制備方法，其特征在于，所述的混合溶劑為體積比1:2的乙酸乙酯和正己烷。

4.一種由權(quán)利要求1所述的克拉霉素半抗原制備的克拉霉素包被原，其特征在于，所述的克拉霉素包被原由所述克拉霉素半抗原與牛血清白蛋白偶聯(lián)制得的，結(jié)構(gòu)式如式Ⅱ所示：

5.一種由權(quán)利要求1所述的克拉霉素半抗原制備的克拉霉素免疫原，其特征在于，所述的克拉霉素免疫原由所述克拉霉素半抗原與鱟血藍(lán)蛋白偶聯(lián)制得的，結(jié)構(gòu)式如式Ⅲ所示：

6.一種克拉霉素單克隆抗體，其特征在于，依次通過下述步驟制得：

1)動物免疫

將權(quán)利要求5所述的克拉霉素免疫原免疫Balb/c小鼠；

2)細(xì)胞融合與篩選

取沖擊免疫后第三天的小鼠脾臟與SP2/O骨髓瘤細(xì)胞融合，融合后第七天采用間接競爭ELISA測定細(xì)胞上清，篩選陽性且有抑制孔的細(xì)胞進(jìn)行亞克隆，經(jīng)過3次以上克隆化培養(yǎng)，直至克隆陽性率為100％，得到一株可分泌克拉霉素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，命名為抗克拉霉素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞CLF3；

3)腹水單抗的制備與純化

用步驟2)制備的抗克拉霉素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞CLF3注射Balb/c小鼠，待小鼠腹部明顯膨大，采取腹水，采用Protein A蛋白親和層析柱對腹水進(jìn)行純化，純化后的腹水保存于-20℃；測定單克隆抗體濃度的蛋白濃度為3.6mg/mL，并且對單克隆抗體鑒定。

7.權(quán)利要求6所述的克拉霉素單克隆抗體在檢測克拉霉素中的應(yīng)用。