[發(fā)明專利]伊木薩克片作用于異常黏液質(zhì)證與陽痿病證模型靶點蛋白及其篩選方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611125778.0
• 申請日: 2016-12-09
• 公開（公告）號: CN106546754B
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 阿地力江·伊明
• 申請（專利權(quán)）人: 新疆醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所11569
• 代理人: 王加貴

1.伊木薩克片藥物靶點蛋白的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提供正常對照組(N組)、異常黏液質(zhì)證候組(ZM組)、異常黏液質(zhì)證候藥物組(ZY組)、異常黏液質(zhì)型病證組(BM組)和異常黏液質(zhì)型病證藥物組(BY組)，N大鼠，對BY組和ZY組大鼠用伊木薩克片喂食2周，BM組、ZM組和N組大鼠喂食水；

2)采集所述步驟1)得到的五組大鼠的全血，分離后得到血清；

取所述步驟1)得到五組大鼠的陰莖平滑肌組織；

3)從所述步驟2)得到的血清和陰莖平滑肌組織中提取蛋白質(zhì)，檢測，得到已知濃度的蛋白質(zhì)；

4)將所述步驟3)中得到的蛋白質(zhì)用iTRAQ標(biāo)記試劑盒標(biāo)記后純化，得到純化后肽段；

5)將所述步驟4)得到的純化后的肽段經(jīng)質(zhì)譜檢測后得到指紋圖譜，將所述指紋圖譜在PD軟件中篩選，將所述篩選后的譜圖用mascot搜索，根據(jù)得到的搜索結(jié)果和篩選后的譜圖進行定量分析，將得到的分析數(shù)據(jù)在大鼠數(shù)據(jù)庫中檢索，獲得大鼠血清差異蛋白質(zhì)和大鼠陰莖平滑肌組織差異蛋白質(zhì)；

6)將所述步驟5)中得到的血清差異蛋白質(zhì)和陰莖平滑肌組織差異蛋白質(zhì)進行伊木薩克片藥物靶點蛋白的篩選；

所述異常黏液質(zhì)血清證候組大鼠藥物靶點蛋白的差異蛋白的篩選具體是：

將所述步驟6)中得到的BM組與N組蛋白質(zhì)相比較，得到BM/N的差異蛋白質(zhì)；將ZM組與N組的蛋白質(zhì)相比較，得到ZM/N的差異蛋白質(zhì)；將所述ZY組與ZM組的蛋白質(zhì)相比較，得到ZY/ZM的差異蛋白，統(tǒng)計BM/N、ZM/N和ZY/ZM差異蛋白的同蛋白的種類和數(shù)量，得到伊木薩克片作用于異常黏液質(zhì)證候組大鼠后的血清藥物靶點蛋白；

所述異常黏液質(zhì)型陽痿病證組大鼠血清和陰莖平滑肌組織藥物靶點蛋白的差異蛋白的篩選具體是：

將所述步驟6)中得到的BM組與ZM組蛋白質(zhì)相比較，得到BM/ZM的差異蛋白質(zhì)；將BM組與N組的蛋白質(zhì)相比較，得到BM/N的差異蛋白質(zhì)；將所述BY組與BM組的蛋白質(zhì)相比較，得到BY/BM的差異蛋白，統(tǒng)計BM/ZM、BM/N和BY/BM差異蛋白的同蛋白的種類和數(shù)量，得到伊木薩克片作用于異常黏液質(zhì)型陽痿病證組大鼠后的血清和陰莖平滑肌組織藥物靶點蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述伊木薩克片中藥物活性成分的質(zhì)量濃度為250mg/kg，所述喂食伊木薩克片的頻率為每日1～2次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述步驟1)中正常對照組在常規(guī)環(huán)境中飼養(yǎng)，喂食的環(huán)境溫度為18～22℃，所述喂食環(huán)境的相對濕度為40～60％；造模組的喂食的環(huán)境溫度為8～12℃，所述喂食環(huán)境的相對濕度70～80％；所述步驟1)中正常對照組為普通飼料，造模組喂食飼料為濕寒性飼料。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述步驟2)中分離得到血清的方法具體是：將新鮮大鼠全血立即置4℃環(huán)境，30～40min后以3000～3500rpm的速度離心5～10min，將得到的上清液在4℃條件下，以3000～3500rpm的速度再次離心，得到血清；所述步驟2)得到陰莖平滑肌組織的方法具體是：從根部取陰莖平滑肌組織，洗去血漬，并除去殘余皮膚、筋膜，取上段陰莖平滑肌組織，放置于凍存管中放置于-80℃超低溫冰箱備用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述步驟3)中檢測包括蛋白質(zhì)的完整性和蛋白質(zhì)的含量的測定。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述伊木薩克片靶點蛋白包括異常黏液質(zhì)大鼠證候組的血清藥物靶點蛋白、異常黏液質(zhì)大鼠血清和陰莖平滑肌組織病證組藥物靶點蛋白。

7.權(quán)利要求1所述方法篩選得到的伊木薩克片藥物作用于異常黏液質(zhì)證候動物模型的血清的靶點蛋白，其特征在于，包括下列蛋白質(zhì)種類：血管緊張素原、T-激肽原1、α-1-酸性糖蛋白、甲狀腺素運載蛋白、絲氨酸蛋白酶抑制劑A3L、絲氨酸蛋白酶抑制劑A3K、α-2-巨球蛋白、羧酸酯酶1C、血清鐵傳遞蛋白、α-1-3抑制劑、α-1-抗蛋白酶、血紅素結(jié)合蛋白、血清淀粉樣物質(zhì)P、β-2-糖蛋白1、肌紅蛋白-1、血小板白細胞c激酶底物、被控多泡體蛋白5、α-1-巨球蛋白、胎球蛋白-B、GRAM結(jié)構(gòu)域的蛋白1A和N-乙酰神經(jīng)氨酸-9-磷酸酶。