[發(fā)明專利]一種油佐劑疫苗的快速定性定量檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611122892.8
• 申請(qǐng)日: 2016-12-08
• 公開（公告）號(hào): CN106771236B
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 俞愛敏;石海芳;馬貴軍;姬明放;劉自立
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 申聯(lián)生物醫(yī)藥（上海）股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N1/30
• 代理公司: 上海漢聲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國(guó)中

本發(fā)明提供了一種油佐劑疫苗的快速定性定量檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法，所述試劑盒包括以下組成部分：破乳劑、注射器、比色卡；所述試劑盒還包括快速檢測(cè)試紙或96孔板；所述破乳劑為含0.33％體積分?jǐn)?shù)鹽酸的乙醇溶液、含0.05％體積分?jǐn)?shù)三氟乙酸的乙腈溶液中的一種。采用本發(fā)明的試劑盒可快速定量定性檢測(cè)油佐劑疫苗中的蛋白含量，該試劑盒制作簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，無需進(jìn)行繁瑣的預(yù)處理，且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，為口蹄疫疫苗行業(yè)提供了一種快速有效的檢測(cè)手段。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及口蹄疫疫苗檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種油佐劑疫苗的快速定性定量檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

市場(chǎng)上現(xiàn)有的口蹄疫疫苗主要分為滅活疫苗和合成肽疫苗，其抗原核心本質(zhì)為蛋白質(zhì)，對(duì)疫苗內(nèi)抗原進(jìn)行檢測(cè)主要為檢測(cè)疫苗破乳后水相中的蛋白質(zhì)含量。但是，口蹄疫疫苗是由抗原與佐劑以一定比例、按特定程序乳化而成的，由于抗原被油佐劑所包裹，無法直接進(jìn)行檢測(cè)。雖然業(yè)內(nèi)已有破乳方法，但其效率和效果均不佳，破乳后會(huì)有種種問題，例如破乳不完全、水相和油相分界不清晰、水相中檢測(cè)不到抗原等問題一直困擾著業(yè)界。

現(xiàn)有的疫苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定效力檢驗(yàn)必須采用本動(dòng)物進(jìn)行檢驗(yàn)，由于國(guó)家實(shí)行100％的強(qiáng)化免疫政策，很難選出易感的檢驗(yàn)用動(dòng)物，而且動(dòng)物攻毒對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)施要求高(BSL3級(jí)實(shí)驗(yàn)室)、耗時(shí)長(zhǎng)(一個(gè)月以上)、資金花費(fèi)大。如果采用血清中和試驗(yàn)選擇易感動(dòng)物，在技術(shù)上難以排除具有細(xì)胞免疫的非易感動(dòng)物，在檢驗(yàn)實(shí)際中經(jīng)常發(fā)生檢驗(yàn)數(shù)據(jù)不規(guī)律的問題，影響檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。因此口蹄疫疫苗尤其是用于牛的疫苗的質(zhì)量檢測(cè)一直困擾著獸藥監(jiān)測(cè)部門和相關(guān)生產(chǎn)企業(yè)。因此需要盡快研制體外檢驗(yàn)技術(shù)，代替現(xiàn)有的本動(dòng)物試驗(yàn)。

口蹄疫疫苗如何檢測(cè)，如何評(píng)價(jià)等問題一直困擾著生產(chǎn)廠家和用戶。當(dāng)前國(guó)家對(duì)疫苗的檢驗(yàn)正逐步過渡到對(duì)疫苗內(nèi)抗原的檢測(cè)，而當(dāng)前較為普遍的方法為疫苗破乳后對(duì)抗原進(jìn)行檢測(cè)，通過將疫苗進(jìn)行破乳處理，使抗原轉(zhuǎn)移至水相中，繼而對(duì)其進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)分析，雖然蛋白檢測(cè)方法較多，但是由于破乳、佐劑干擾等問題無法解決，因此業(yè)內(nèi)還沒有能夠?qū)谔阋咭呙邕M(jìn)行檢驗(yàn)的統(tǒng)一且準(zhǔn)確的方法，對(duì)于疫苗用戶而言更缺乏快速定性定量的檢測(cè)方法。因此，尋找一種能快速簡(jiǎn)單且經(jīng)濟(jì)實(shí)用的蛋白質(zhì)檢測(cè)試劑已經(jīng)刻不容緩了。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明提供了一種油佐劑疫苗的快速定性定量檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明提供了一種油佐劑疫苗的快速定性定量檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括以下組成部分：破乳劑、注射器、比色卡；所述試劑盒還包括快速檢測(cè)試紙或96孔板；所述破乳劑為含0.33％體積分?jǐn)?shù)鹽酸的乙醇溶液、含0.05％體積分?jǐn)?shù)三氟乙酸的乙腈溶液中的一種。所述三氟乙酸和鹽酸類似催化劑，可促進(jìn)破乳，加速乳化膜的破解。

更優(yōu)選地，所述破乳劑為含0.05％體積分?jǐn)?shù)三氟乙酸的乙醇溶液。由于乙醇無毒，且性價(jià)比高。

優(yōu)選地，所述快速檢測(cè)試紙經(jīng)考馬斯亮藍(lán)G-250、乙醇、磷酸的混合液浸漬。

優(yōu)選地，所述96孔板各孔內(nèi)均加入考馬斯亮藍(lán)G-250、乙醇、磷酸的混合液，然后以封板膜封口。

優(yōu)選地，所述混合液中，考馬斯亮藍(lán)G-250的終濃度為0.1mg/ml，乙醇的體積終濃度為5％，磷酸的體積終濃度為8.5％。

優(yōu)選地，所述比色卡為根據(jù)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白溶液使用所述快速檢測(cè)試紙顯色后制成。

優(yōu)選地，所述比色卡為根據(jù)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白溶液滴入96孔板內(nèi)顯色后制成。

優(yōu)選地，所述標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白溶液的濃度分別為：10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml、50ug/ml、60ug/ml、70ug/ml、80ug/ml、90ug/ml、100ug/ml。