[發明專利]一種ZNF667蛋白的RNA干擾質粒及其應用方法

有效

• 申請號: 201611114524.9
• 申請日: 2016-12-07
• 公開（公告）號: CN106636200B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 譚思創;譚斯品;成柯;陳志康;段元冬
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅二醫院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A61K48/00;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

1.一種 ZNF667蛋白的短發夾RNA干擾質粒的應用方法，其特征在于，用于制備抑制肝癌的制劑，所述的ZNF667蛋白的短發夾RNA干擾質粒是根據 ZNF667的序列設計能夠產生干擾 ZNF667蛋白表達的siRNA的DNA片段，插入到短發夾RNA干擾載體中構建而成。

2.根據權利要求1所述的ZNF667蛋白的短發夾RNA干擾質粒的應用方法，其特征在于，

以人 ZNF667的mRNA序列為模板，以及載體啟動子啟動表達siRNA對序列的要求，設計合成能夠產生干擾ZNF667蛋白表達的siRNA的DNA片段。

3.根據權利要求2所述的ZNF667蛋白的短發夾RNA干擾質粒的應用方法，其特征在于，siRNA干擾的目標基因ZNF667序列如下：

siRNA-1：CGAATATCTCTCACACGACAT；

siRNA-2：CGCCAATCATTTCTTATTGAA；

siRNA-3：CAACCCTTATTCTGCATCTAA。

4.根據權利要求3所述的ZNF667蛋白的短發夾RNA干擾質粒的應用方法，其特征在于，

siRNA干擾的目標基因ZNF667序列為siRNA-2：CGCCAATCATTTCTTATTGAA。

5.根據權利要求3所述的ZNF667蛋白的短發夾RNA干擾質粒的應用方法，其特征在于，

選用的原始質粒表達載體優選為pRNAT-U6.1/Neo。

6.根據權利要求5所述的ZNF667蛋白的短發夾RNA干擾質粒的應用方法，其特征在于，DNA片段插入到載體時的酶切位點為BamH I和Hind III。

7.根據權利要求6所述的ZNF667蛋白的短發夾RNA干擾質粒的應用方法，其特征在于，根據ZNF667的序列設計能夠產生干擾ZNF667蛋白表達的siRNA的DNA片段，具體序列如下：

ZNF667-shRNA-1 a鏈序列：

5’-

GATCCCCGAATATCTCTCACACGACATCTCGAGATGTCGTGTGAGAGATATTCGTTTTTGGAT -3’

ZNF667-shRNA-1 b鏈序列：

5’-

AGCTATCCAAAAACGAATATCTCTCACACGACATCTCGAGATGTCGTGTGAGAGATATTCG GG -3’

ZNF667-shRNA-2 a鏈序列：

5’-

GATCCCCGCCAATCATTTCTTATTGAACTCGAGTTCAATAAGAAATGATTGGCG TTTTTGGAT -3’

ZNF667-shRNA-2 b鏈序列：

5’-

AGCTATCCAAAAAGCCAATCATTTCTTATTGAACTCGAGTTCAATAAGAAATGATTGGCG GG -3’

ZNF667-shRNA -3a鏈序列:

5’-

GATCCCCAACCCTTATTCTGCATCTAACTCGAGTTAGATGCAGAATAAGGGTTG TTTTTGGAT -3’

ZNF667-shRNA -3b鏈序列:

5’-

AGCTATCCAAAAACAACCCTTATTCTGCATCTAACTCGAGTTAGATGCAGAATAAGGGTTGGG-3’。