[發(fā)明專利]一種聯(lián)產(chǎn)丙酮酸和α-酮戊二酸的重組光滑球擬酵母

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611112770.0
• 申請日: 2016-12-07
• 公開（公告）號: CN106635852B
• 公開（公告）日: 2019-11-26
• 發(fā)明（設計）人: 周景文;陳堅;羅正山;堵國成;劉松;方芳
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12P7/40;C12P7/50;C12R1/645
• 代理公司: 23211 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權代理有限公司
• 代理人: 彭素琴<國際申請>=<國際公布>=<進入

1.一種聯(lián)產(chǎn)丙酮酸和α-酮戊二酸的重組菌，其特征在于，所述重組菌是以光滑球擬酵母為宿主，以pY26-TEF-GPD為載體，過表達丙酮酸激酶CDC19基因；所述CDC19基因是NCBI上Gene ID為851193的CDC19基因。

2.根據(jù)權利要求1所述的重組菌，其特征在于，所述重組菌是以缺失了URA3基因的光滑球擬酵母(T.glabrata)CCTCC NO.M202019為宿主，表達NCBI上Gene ID:851193的CDC19。

3.權利要求2所述的重組菌的構建方法，其特征在于，是以缺失了URA3基因的光滑球擬酵母(T.glabrata)CCTCC NO.M202019為宿主，以pY26-TEF-GPD為載體，表達NCBI上Gene ID為851193的CDC19基因。

4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，所述重組菌按如下方法構建：

(1)將目的片段CDC19經(jīng)過限制性內(nèi)切酶Not I和Pac I雙酶切消化后，定向克隆到表達質(zhì)粒pY26-TEF-GPD中，得到重組酵母表達質(zhì)粒pY26-CDC19；

(2)將重組質(zhì)粒pY26-CDC19電轉化至受體菌T.glabrata CCTCC NO.M202019，在不含尿嘧啶的培養(yǎng)基中進行篩選，得到重組菌。

5.一種聯(lián)產(chǎn)丙酮酸和α-酮戊二酸的方法，其特征在于，是將權利要求1-2任一項所述的重組菌應用于丙酮酸和α-酮戊二酸的生產(chǎn)。

6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，將權利要求1-2任一項所述的重組菌接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，在30℃，200～220rpm條件下進行發(fā)酵培養(yǎng)。

7.根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基每L中含有：葡萄糖50-120g，尿素≤5g，MgSO₄.7H₂O≤1g，KH₂PO₄≤5g，CH₃COONa≤5g，微量元素液10mL，維生素液10mL，初始pH＝5.5；所述微量元素液每L含有MnCl₂·4H₂O≤12g，F(xiàn)eSO₄·7H₂O≤2g，CaCl₂·2H₂O≤2g，CuSO₄·5H₂O≤0.1g，ZnCl₂≤1g；所述維生素液每L含有：生物素≤0.01g，硫胺素≤2mg，吡哆醇≤0.2g，煙酸≤2g。

8.根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于，所述接種的接種量按體積比為5-10％。

9.權利要求5-8任一項所述的方法在日化、食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)領域生產(chǎn)含丙酮酸和/或α-酮戊二酸的產(chǎn)品中的應用。