[發明專利]用于預防宮腔粘連及子宮內膜損傷修復的細胞制劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201611112431.2
• 申請日: 2016-12-06
• 公開（公告）號: CN106730013A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 徐妍;陳蕾;郭世磊;魏翠;李紅蘭;王海亞
• 申請（專利權）人: 徐妍
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/54;A61L27/20;A61L27/22;A61L27/52;A61L27/50;C12N5/0789
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司32243
• 代理人: 盧霞

技術領域

本發明屬于婦產科學領域，其涉及用于預防宮腔粘連及修復子宮內膜損傷的細胞制劑及其制備方法。

背景技術

宮腔粘連(intrauterine adhesions，IUA)又稱Asherman綜合征，是指由創傷、感染等因素造成的子宮內膜基底層細胞的損傷導致子宮腔內粘連組織形成，引起宮腔變形甚至宮腔完全消失，使患者出現月經異常(閉經或月經量減少等)、不孕、流產、早產及周期性腹痛等異常情況。近年來由于頻繁的宮腔操作及宮腔鏡手術的普及，子宮粘連的發病率和檢出率逐漸上升，而且發病年齡呈年輕化趨勢，已成為女性繼發不孕的第二大病因。盡管臨床醫生不斷尋求新的治療方案，子宮粘連的治愈率和妊娠率仍無明顯改善，且復發率較高(輕度IUA患者治療后復發率為33.3％，重度IUA患者治療后復發率更是高達66.7％)，由此引起的不孕以及反復流產、早產、前置胎盤、胎盤粘連或植入等產科并發癥嚴重威脅著女性的生殖健康。目前臨床上針對IUA的治療主要是采用宮腔鏡下宮腔粘連分離術、術后放置宮內節育器或防粘連材料(主要為透明質酸鈉凝膠)以及術后應用雌孕激素治療，但是以上方法存在著治療周期長、治愈率低下、粘連易復發、妊娠率低、大劑量雌激素應用會增加患者乳腺和子宮內膜腫瘤風險等問題。此外，對于嚴重的子宮內膜損傷，該治療方法并不能解決內膜疤痕問題，且無法實現子宮內膜功能性修復及生育功能的恢復。研究報道采用人羊膜植入治療IUA可促進子宮內膜生長，抑制纖維化瘢痕的形成，可同樣對于重度子宮內膜損傷患者來說，該方法也無法實現子宮內膜功能性修復。子宮腔灌注粒細胞集落刺激因子可使部分內膜薄患者內膜厚度增加，但該方法存在作用時間短，局部療效差，且無法促進疤痕內膜生長等缺陷。骨髓間充質干細胞治療宮腔粘連，可以促進子宮內膜組織再生，實現子宮內膜功能性修復，但是單一應用骨髓間充質干細胞存在難于局部定位以及修復不穩定、不徹底等問題。膠原支架復合骨髓或臍帶間充質干細胞可以治療嚴重子宮內膜損傷，促進疤痕子宮內膜修復，恢復患者生育功能，但是此法也存在的一定的局限性，比如細胞制劑制備方法復雜，細胞獲取不方便，細胞獲取或細胞制劑應用時對患者造成的痛苦大及創傷大等。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，針對現有技術中細胞獲取不便、對患者造成的痛苦大、創傷大及采用單一干細胞存在難于局部定位、修復不穩定、不徹底以及傳統宮腔粘連及子宮內膜損傷修復方法無法實現嚴重子宮內膜再生修復、子宮內膜功能性恢復或作用時間短，局部療效差等問題，提供一種能夠高效預防宮腔粘連及修復嚴重子宮內膜損傷的混合干細胞制劑及其制備方法。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種用于預防宮腔粘連及修復子宮內膜損傷的細胞制劑，所述的細胞制劑由間充質干細胞、人重組基質細胞衍生因子-1α(rhSDF-1α)和用于承載間充質干細胞及rhSDF-1α的透明質酸鈉凝膠組成，所述的間充質干細胞為臍帶間充質干細胞或胎盤間充質干細胞。

所述的間充質干細胞的來源為人臍帶或胎盤；

所述的細胞制劑中，間充質干細胞的濃度為5×10⁶～2×10⁸個/mL；

所述的間充質干細胞為原代-第10代的間充質干細胞；優選地，所述的間充質干細胞為原代-第3代的間充質干細胞。

所述的細胞制劑中，rhSDF-1α的質量濃度為10-150ng/mL；

所述的細胞制劑中，透明質酸鈉凝膠的質量濃度為10-100mg/mL；

所述的透明質酸鈉凝膠的分子量為400000-1000000；

所述的透明質酸鈉凝膠為醫用透明質酸鈉凝膠。

所述的細胞制劑為混懸液。

所述的細胞制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)制備臍帶或胎盤間充質干細胞；

2)將所述臍帶或胎盤間充質干細胞與rhSDF-1α和透明質酸鈉凝膠按比例混合，制得。

所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，包括如下步驟：

1)取志愿、健康合格孕婦的足月剖宮產的新生兒臍帶，充分洗滌去除臍動靜脈中的血管；

2)將臍帶組織剪成塊狀，加入膠原酶消化液，37℃恒溫搖床中振蕩消化，完全培養基(DMEM)和10％胎牛血清(FBS)終止消化；

3)50目篩網過濾人臍帶組織消化后的產物；

4)將收集的過濾液離心、分離獲得單個核細胞；