[發(fā)明專利]用于預(yù)防宮腔粘連及子宮內(nèi)膜損傷修復(fù)的細(xì)胞制劑及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611112431.2
• 申請(qǐng)日: 2016-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN106730013A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐妍;陳蕾;郭世磊;魏翠;李紅蘭;王海亞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 徐妍
• 主分類號(hào): A61L27/38
• 分類號(hào): A61L27/38;A61L27/54;A61L27/20;A61L27/22;A61L27/52;A61L27/50;C12N5/0789
• 代理公司: 南京正聯(lián)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司32243
• 代理人: 盧霞

1.一種用于預(yù)防宮腔粘連及修復(fù)子宮內(nèi)膜損傷的細(xì)胞制劑，其特征在于，所述的細(xì)胞制劑由間充質(zhì)干細(xì)胞、人重組基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α(rhSDF-1α)和用于承載間充質(zhì)干細(xì)胞及rhSDF-1α的透明質(zhì)酸鈉凝膠組成，所述的間充質(zhì)干細(xì)胞為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞或胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞制劑，其特征在于：

所述的間充質(zhì)干細(xì)胞的來源為人臍帶或胎盤；

所述的細(xì)胞制劑中，間充質(zhì)干細(xì)胞的濃度為5×10⁶～2×10⁸個(gè)/mL；

所述的間充質(zhì)干細(xì)胞為原代-第10代的間充質(zhì)干細(xì)胞；

所述的細(xì)胞制劑中，rhSDF-1α的質(zhì)量濃度為10-150ng/mL；

所述的細(xì)胞制劑中，透明質(zhì)酸鈉凝膠的質(zhì)量濃度為10-100mg/mL；

所述的透明質(zhì)酸鈉凝膠的分子量為400000-1000000；

所述的透明質(zhì)酸鈉凝膠為醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的細(xì)胞制劑，其特征在于，所述的間充質(zhì)干細(xì)胞為原代-第3代的間充質(zhì)干細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的細(xì)胞制劑，其特征在于，所述的細(xì)胞制劑為混懸液。

5.如權(quán)利要求1-4所述的細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)制備臍帶或胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞；

2)將所述臍帶或胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞與rhSDF-1α和透明質(zhì)酸鈉凝膠按比例混合，制得。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，所述的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法，包括如下步驟：

1)取志愿、健康合格孕婦的足月剖宮產(chǎn)的新生兒臍帶，充分洗滌去除臍動(dòng)靜脈中的血管；

2)將臍帶組織剪成塊狀，加入膠原酶消化液，37℃恒溫?fù)u床中振蕩消化，完全培養(yǎng)基(DMEM)和10％胎牛血清(FBS)終止消化；

3)50目篩網(wǎng)過濾人臍帶組織消化后的產(chǎn)物；

4)將收集的過濾液離心、分離獲得單個(gè)核細(xì)胞；

5)將離心后獲得單個(gè)核細(xì)胞重懸于完全培養(yǎng)基(DMEM+10％FBS)，接種于培養(yǎng)皿中，在37℃，體積分?jǐn)?shù)為5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

6)待細(xì)胞生長(zhǎng)至80-90％融合度時(shí)，用胰酶消化進(jìn)行傳代培養(yǎng)，即得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞；必要時(shí)進(jìn)行凍存待用。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，所述的胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法，包括如下步驟：

1)取志愿、健康合格孕婦的足月剖宮產(chǎn)胎兒的胎盤，PBS反復(fù)沖洗去除胎盤血；

2)將胎盤組織剪成塊狀，加入膠原酶消化液，37℃恒溫?fù)u床中振蕩消化，完全培養(yǎng)基(DMEM+10％FBS)終止消化；

3)50目篩網(wǎng)過濾人胎盤組織消化后的產(chǎn)物；

4)將收集的過濾液離心、分離獲得單個(gè)核細(xì)胞；

5)將離心后獲得單個(gè)核細(xì)胞重懸于完全培養(yǎng)基(DMEM+10％FBS)，接種于培養(yǎng)皿中，在37℃，體積分?jǐn)?shù)為5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

6)待細(xì)胞生長(zhǎng)至80-90％融合度時(shí)，用胰酶消化進(jìn)行傳代培養(yǎng)，即得胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞；必要時(shí)進(jìn)行凍存待用。