[發明專利]新的HPV抗原表位

在審

• 申請號: 201611112122.5
• 申請日: 2016-12-07
• 公開（公告）號: CN108164587A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 趙曉航;周典蓉;鄭巍薇;孫玉琳;代淑陽;劉芳;周蘭萍
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院腫瘤醫院
• 主分類號: C07K14/025
• 分類號: C07K14/025;C07K16/08;C12N15/37;G01N33/569;A61K39/12;A61P31/20;A61P35/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李英

本發明涉及新型HPV抗原表位，其序列為選自SEQ ID NO：1?5的氨基酸序列或與選自SEQ ID NO：1?5的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。本發明還涉及將所述抗原表位用于檢測樣品中是否存在抗HPV特別是高危型HPV的抗體以及用于檢測受試者中的HPV特別是高危型HPV的感染情況。

發明領域

本發明涉及新型HPV抗原表位及其用途。

發明背景

食管癌在世界范圍內腫瘤發病率位居第8位。在中國，食管癌的主要組織學類型為食管鱗癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)。食管鱗癌的發生為環境因素與遺傳因素相互作用的結果，其中環境因素包括飲食習慣、吸煙、飲酒等，并且可能與病毒感染相關。

感染是腫瘤發生的因素之一，2008年由感染而導致的腫瘤占所有腫瘤的16.1％。其中人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)是一種重要的致癌病毒。文獻報道90％的宮頸鱗狀細胞癌與HPV感染有關，且在口咽鱗狀細胞癌中也存在一類與HPV感染有關的亞類。此外有研究報道在食管腺癌中HPV的檢出陽性率高達66.7％，且與疾病嚴重程度相關。

人的一生中感染HPV的可能性超過80％，然而僅高危型HPV(hr-HPV)可能引發惡性腫瘤。hr-HPV包括HPV16、18、33、58等，其中HPV16是宮頸鱗癌和口腔鱗癌中最為常見的病毒亞型之一。hr-HPV的編碼蛋白包括早期蛋白(包括E1～E8)和晚期蛋白(包括衣殼蛋白L1、L2)。hr-HPV的致癌作用主要依賴于其致癌蛋白E6、E7的作用，二者可激活不可再生細胞的DNA合成、抑制細胞死亡、阻礙細胞分化。

食管鱗癌與宮頸鱗狀細胞癌、口咽鱗狀細胞癌從組織學上均起源于鱗狀上皮，且食管與口咽部毗鄰，因此HPV可能通過口咽部下行至食管，而hr-HPV在食管鱗癌中的感染率與潛在關聯是研究熱點之一。盡管存在動物模型的證據，但hr-HPV在人食管鱗癌中檢出率有巨大差異。同時由于HPV病毒顆粒廣泛存在于環境中，在檢測過程中容易由于操作不當引入環境中的hr-HPV DNA，污染樣本而引起假陽性。故hr-HPV的檢測需要嚴格的實驗室操作要求。

大多數病毒感染屬于“一過式感染”，病毒顆粒在感染后1～2年就會由于被免疫系統清除而無法通過檢測病毒核酸的方式被檢測到。然而，病毒感染可通過刺激免疫系統產生記憶T細胞或記憶B細胞的形式在體內留下印記，這些印記在體內存在的時間可長達數十年。因此通過檢測血清中病毒抗體的存在，可以了解病毒的累積感染情況，避免由于病毒被清除而造成的低估。

已有研究通過血清學手段檢測食管鱗癌中HPV的感染情況，但大部分檢測目標是血清中抗HPV病毒樣顆粒(Vesicle-like Particles，VLP)的抗體，而檢測抗癌蛋白E6、E7抗體則非常少見。研究認為血清抗E6、E7抗體是HPV感染導致腫瘤的高度特異性標志，其水平被認為是頭頸癌中一個敏感的預后標志。因此檢測血清中抗E6、E7抗體較檢測VLP抗體更具有臨床意義。

目前的血清學檢測手段主要通過ELISA方法檢測。ELISA方法主要合成重組蛋白以捕捉血清中的目標抗體。免疫系統識別抗原的關鍵是抗原表位，而非整個蛋白。使用抗原表位足以捕捉血清中的抗體，避免蛋白非表位部分造成的干擾，提高檢測效率。同時與合成整個重組蛋白相比，合成抗原表位費用較為低廉，可降低前期投入成本。此外，可將不同蛋白的抗原表位整合至一張膜或芯片上，提高檢測通量。目前針對HPV的抗原表位研究主要在衣殼蛋白L1、L2上，并已形成以hr-HPV L1、L2為靶點的預防性疫苗，用以預防宮頸鱗癌等HPV感染而導致的腫瘤。然而針對hr-HPV癌蛋白E6、E7的抗原表位未見報道。因此，目前仍然存在對于檢測血清中HPV相關抗體的改進方法的需要。

發明內容

本發明通過提供新的HPV抗原表位來解決本領域中存在的上述問題。