[發(fā)明專利]一種與堿性磷酸酶反應產生化學發(fā)光的化合物的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611112013.3
• 申請日: 2016-12-07
• 公開（公告）號: CN106749404B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發(fā)明（設計）人: 李明勇;姜雪蓮;龔小貴;黃金浪;曹文軍;黃偉
• 申請（專利權）人: 湖南遠璟生物技術有限公司
• 主分類號: C07F9/64
• 分類號: C07F9/64;C09K11/06
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• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種與堿性磷酸酶反應產生化學發(fā)光的化合物制備方法，包括以下步驟，按順序依次進行合成：（1）合成吖啶?9?酰氯；（2）合成9,10?二氫化吖啶?9?酰氯；（3）合成10?甲基?9,10?二氫化吖啶?9?酰氯；（4）合成10?甲基?9,10?二氫化吖啶?9?硫代羧酸?3’?乙氧苯酯；（5）合成9?（3’?乙氧苯基硫代磷酸氧亞甲基）?10?甲基?9,10?二氫化吖啶二（氰乙基）酯。本發(fā)明的制備方法工藝簡單，穩(wěn)定性好，價格便宜。

技術領域

本發(fā)明涉及一種與堿性磷酸酶反應產生化學發(fā)光的化合物的制備工藝，屬于化學發(fā)光免疫分析的技術領域。

技術背景

化學發(fā)光酶疫分析包含了免疫化學反應和化學發(fā)光反應兩個部分。免疫分析系統(tǒng)是將酶標記在抗原或抗體上，經過抗原與抗體特異性反應形成抗原－抗體免疫復合物。化學發(fā)光分析系統(tǒng)是在免疫反應結束后，加入酶的發(fā)光底物，化學發(fā)光物質經酶催化后，形成一個處于激發(fā)態(tài)的中間體，會發(fā)射光子釋放能量以回到穩(wěn)定的基態(tài)，發(fā)光強度可以利用發(fā)光信號測量儀器進行檢測。待測物質濃度因為與發(fā)光強度成一定的關系而實現(xiàn)檢測目的。

堿性磷酸酶在化學發(fā)光酶疫分析應用比較廣泛，目前使用最多的發(fā)光底物是1，2－二氧環(huán)己烷，主要是AMPPD及其衍生物。此類物質大多為國外專利產品，價格昂貴、不易購買。

堿性磷酸酶能催化二氫吖啶磷酸酯類化合物反應并產生化學發(fā)光，此種反應速度快，發(fā)光到達平臺期時間短，已經用于堿性磷酸酶的活性檢測和堿性磷酸酶酶聯(lián)免疫反應檢測。

中國專利CN104761584A、CN104418887A和CN1312252A公開了幾種二氫吖啶磷酸酯類化合物的合成方法。但是合成工藝較為復雜，合成物質穩(wěn)定性較差。

本發(fā)明提供了一種的新化合物的制備方法，該化合物制備工藝較簡單，穩(wěn)定性好，價格便宜。

發(fā)明內容

本發(fā)明公開了一種與堿性磷酸酶反應產生化學發(fā)光的化合物的制備方法。其中，該化合物結構式如下：

，該化合物的NMR圖如圖2所示。

該化合物的制備方法包括以下步驟（如圖1所示）：

（1）合成吖啶-9-酰氯：將吖啶-9-羧酸溶于三氯甲烷中，加入4-二甲氨基吡啶，緩慢滴加亞硫酰氯，并回流該反應混合物，減壓除去溶劑得到黃色固體。

（2）合成9,10-二氫化吖啶-9-酰氯：將吖啶-9-酰氯懸浮于甲醇中，分別先后加入氯化銨和鋅到該溶液中，回流反應該反應混合物，過濾該溶液并用甲醇洗滌該沉淀，蒸發(fā)干燥得到產物9,10-二氫化吖啶-9-酰氯。

（3）合成10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-酰氯：將9,10-二氫化吖啶-9-酰氯溶于甲苯溶液中，冰浴控溫，加入碳酸二甲酯和碳酸銫，攪拌反應，升溫至室溫，攪拌反應，蒸發(fā)干燥除去溶劑，加入乙酸乙酯做萃取劑，減壓除去萃取劑得到產物10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-酰氯。

（4）合成10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯：將制備好的10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-酰氯溶于三氯甲烷中，分別加入3-乙氧基苯硫酚和4-二甲氨基吡啶，冰浴控溫0～10℃，攪拌反應，然后撤去冰浴，室溫再反應，干燥蒸發(fā)得到產10-甲 基-9,10-二氫化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯。