[發明專利]一種與堿性磷酸酶反應產生化學發光的化合物的制備方法

有效

• 申請號: 201611112013.3
• 申請日: 2016-12-07
• 公開（公告）號: CN106749404B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 李明勇;姜雪蓮;龔小貴;黃金浪;曹文軍;黃偉
• 申請（專利權）人: 湖南遠璟生物技術有限公司
• 主分類號: C07F9/64
• 分類號: C07F9/64;C09K11/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種與堿性磷酸酶反應產生化學發光的化合物的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟：

（1）合成吖啶-9-酰氯：將吖啶-9-羧酸溶于三氯甲烷中，加入4-二甲氨基吡啶，緩慢滴加亞硫酰氯，并回流該反應混合物，減壓除去溶劑得到黃色固體；

（2）合成9,10-二氫化吖啶-9-酰氯：將吖啶-9-酰氯懸浮于甲醇中，分別先后加入氯化銨和鋅到該溶液中，回流反應該反應混合物，過濾該溶液并用甲醇洗滌該沉淀，蒸發干燥得到產物9,10-二氫化吖啶-9-酰氯；

（3）合成10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-酰氯：將9,10-二氫化吖啶-9-酰氯溶于甲苯溶液中，冰浴控溫，加入碳酸二甲酯和碳酸銫，攪拌反應，升溫至室溫，攪拌反應，蒸發干燥除去溶劑，加入乙酸乙酯做萃取劑，減壓除去萃取劑得到產物10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-酰氯；

（4）合成10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯：將制備好的10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-酰氯溶于三氯甲烷中，分別加入3-乙氧基苯硫酚和4-二甲氨基吡啶，冰浴控溫0～10℃，攪拌反應，然后撤去冰浴，室溫再反應，干燥蒸發得到產物10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯；

（5）合成9-（3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亞甲基）-10-甲基-9,10-二氫化吖啶二（氰乙基）酯：將10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯溶于四氫呋喃溶液中干冰浴維持-80℃條件下，滴加入2mol/L 溶于四氫呋喃的LDA，攪拌反應后，加入三氯氧磷和4-二甲氨基吡啶，連續攪拌，撤去干冰浴自然升溫并再繼續攪拌，再用冰浴冷卻該溶液并緩慢滴加3-羥基丙腈，加完后撤去冰浴室溫攪拌，濾去沉淀并減壓除去反應試劑，將殘留物溶于乙酸乙酯，用氮氣作為保護劑，滴加入2MOL/L氫氧化鉀溶液，攪拌反應，抽濾所形成的沉淀并 空氣干燥，得到微黃色固態產物9-（3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亞甲基）-10-甲基-9,10-二氫 化吖啶二鉀鹽。

2.根據權利要求1所述的一種與堿性磷酸酶反應產生化學發光的化合物的制備方法，其特征在于，步驟（1）中吖啶-9-羧酸用量為1g～5g， 4-二甲氨基吡啶用量為0.2g～5g，亞硫酰氯用量為2～5mL，反應時間為6～12小時。

3.根據權利要求1所述的一種與堿性磷酸酶反應產生化學發光的化合物的制備方法，其特征在于，步驟（2）中吖啶-9-酰氯用量為0.5～2.0g，氯化銨用量為5～10g，鋅用量為5～10g，回流反應時間為1～2小時。

4.根據權利要求1所述的一種與堿性磷酸酶反應產生化學發光的化合物的制備方法，其特征在于，步驟（3）中9,10-二氫化吖啶-9-酰氯用量為1g～5g，冰浴控溫0～10℃，碳酸二甲酯用量為0.5～1g，碳酸銫用量為0.1～0.5g，攪拌反應時間為30～60分鐘，升溫至室溫后，攪拌反應時間為1～2小時。

5.根據權利要求1所述的一種與堿性磷酸酶反應產生化學發光的化合物的制備方法，其特征在于，步驟（4）中10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-酰氯的用量為0.5～5g， 3-乙氧基苯硫酚的用量為1g～5g，4-二甲氨基吡啶的用量為0.5g～2g，冰浴控溫0～10℃，攪拌反應30～60分鐘，然后撤去冰浴，室溫再反應1～2小時。

6.根據權利要求1所述的一種與堿性磷酸酶反應產生化學發光的化合物的制備方法，其特征在于，步驟（5）中的10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯的用量為0.5～2.0g，攪拌反應時間為1～2小時，三氯氧磷的用量為0.1～1.0g， 4-二甲氨基吡啶的用量為1～2g，連續攪拌時間為1～2小時小時，撤去干冰浴自然升溫并再繼續攪拌時間為1～2小時，3-羥基丙腈的用量為1～2mL，加完后撤去冰浴室溫攪拌時間為6～12小時，2mol/L氫氧化鉀溶液用量為0.5～1.0mL。