[發明專利]用于檢測COX-1、COX-2和GPIIIa基因多態性的核酸、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201611107856.4
• 申請日: 2016-12-06
• 公開（公告）號: CN106834434B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 李存耀;史學暉;段衛濤;趙平鋒
• 申請（專利權）人: 武漢海吉力生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 程殿軍;張瑾

本發明公開了用于檢測COX?1、COX?2和GPIIIa基因多態性的核酸及試劑盒，同時建立具有特異性強、靈敏度高、準確度高、操作簡單的檢測COX?1、COX?2和GPIIIa基因多態性的檢測方法。其檢測結果為阿司匹林抵抗提供指導性意義。本發明提供的檢測方法采用完全閉管操作，操作簡單、方便快捷、通過直接探測PCR過程中熒光信號值的獲得檢測的結果，不需要PCR后處理或電泳檢測，克服了常規PCR技術的易污染、出現假陽性，能有效避免非特異性擴增難題，并且適合大批量樣本的檢測。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種用于檢測COX-1、COX-2和GPIIIa基因多態性的核酸、試劑盒及方法。

背景技術

單核苷酸多態性(Single Nucleotide Polymorphisms，SNP)是指在基因組上單個核苷酸的變異(包括置換、顛換、缺失和插入)形成的遺傳標記，相比微衛星分子標記，其數量多，多態性豐富。一般而言，SNP是指變異頻率大于1％的單核苷酸變異。在人類基因組中大概每1000個堿基就有一個SNP，人類基因組上的SNP總量大概是3×10⁶個。因此，SNP成為第三代遺傳標志，人體許多表型差異、對藥物敏感度或疾病的易感性等都可能與SNP有關。

隨著我國人口老齡化，心腦血管病發病率逐年攀升，心腦血管疾病早已成為人類健康的第一大殺手，心腦血管疾病的高致死率、致殘率和復發率已造成了極大的社會負擔和經濟負擔。抗血小板藥物(尤其是阿司匹林)在心腦血管病的防治中起著至關重要的作用，但是目前的調查結果表明很多心腦血管病患者即使服用了抗血小板藥物，仍然反復再發卒中，這種現象稱為抗血小板藥物抵抗。

抗血小板藥物抵抗與諸多因素相關，如心腦血管病的相關危險因素(糖尿病、代謝綜合征、急性冠脈綜合征疾病等)，患者依從性或藥物劑量，藥物相互作用及基因多態性等。其中基因多態性因素是目前研究熱點。阿司匹林在體內主要是通過與內皮細胞環氧酶(Cyclooxygenase，COX)的結合使其失活，從而抑制血栓素A2(TXA2)和前列環素(PGI2)的產生，達到抗血小板的作用。既往研究發現，在體內影響阿司匹林作用的多個環節因子存在基因多態性，這種多態性直接影響其功能，從而使得不同個體服用阿司匹林后，對血小板的反應不同。據不完全統計，臨床阿司匹林抵抗的患者高達40％。阿司匹林作為缺血性腦血管疾病二級預防的重要藥物，盡快明確阿司匹林抵抗相關基因多態性至關重要。

COX有兩種同工酶，即COX-1和COX-2。COX-l主要在成熟血小板表達，阿司匹林通過乙酰化COX-1活性位點530位的絲氨酸，不可逆抑制COX-1的活性，從而阻斷血栓素A2(TXA2)介導的血小板活化，用于預防血栓性血管事件的發生。研究發現COX-1常見的4個多態性位點與阿司匹林抵抗的關系，發現SNP中A842G與阿司匹林抵抗有關，在用AA誘導測血小板聚集率時，阿司匹林抵抗患者中攜帶G等位基因的頻率，要遠高于阿司匹林敏感者，用PFA-100測血小板功能時，攜帶G等位基因的患者，有著更短的閉孔時間。COX-2為誘導型酶，生理情況下，在大多數組織和細胞中檢測不到，離體情況下，許多刺激物，如生長因子、炎性細胞因子腫瘤誘導劑等可刺激細胞的COX-2表達。COX-2在動脈粥樣斑塊中表達，阿司匹林劑量需要達到抑制COX-1劑量的170倍，才能阻斷COX-2，小劑量阿司匹林不能完全抑制COX-2誘導的TXA2生成，也是阿司匹林抵抗的原因之一。COX-2基因啟動子-765G＞C多態位點研究表明GC雜合基因攜帶者與GG純合基因攜帶者相比較，前者對阿司匹林藥效不敏感的概率是后者的3.872倍。