[發明專利]一種五味子體細胞胚及其培養方法、培養基及應用

有效

• 申請號: 201611106501.3
• 申請日: 2016-12-05
• 公開（公告）號: CN106754629B
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 孫丹;艾軍;秦洪艷;許培磊;趙瀅;劉迎雪;王振興;楊義明;范書田
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院特產研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C08H7/00
• 代理公司: 11371 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 孫海杰

1.一種五味子體細胞胚的培養方法，其特征在于，其包括：

取五味子外植體進行前誘導培養，得到五味子胚性愈傷組織；

將所述五味子胚性愈傷組織接種至體細胞胚誘導培養基中，進行體細胞胚誘導培養，得到含木質素的體細胞胚；

其中，所述體細胞胚誘導培養基由每升1/2 MS培養基中添加0.45-0.52mg BA、28-32g碳源以及0.4-0.6g氮源制成，所述體細胞胚誘導培養基的pH為5.6-6.0，所述碳源是選自葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖以及山梨醇中的任意一種，所述氮源是選自椰汁、酵母提取物、水解酪蛋白以及水解乳蛋白中的任意一種。

2.根據權利要求1所述的五味子體細胞胚的培養方法，其特征在于，所述體細胞胚誘導培養的條件是：溫度為23-27℃、通氣量為0.15-0.25vvm的條件下暗培養28-30d。

3.根據權利要求1所述的五味子體細胞胚的培養方法，其特征在于，所述前誘導培養包括：

將所述五味子外植體于預培養基上進行預培養，得到五味子愈傷組織；

將所述五味子愈傷組織于胚性誘導培養基上進行胚性誘導培養，得到所述五味子胚性愈傷組織。

4.根據權利要求3所述的五味子體細胞胚的培養方法，其特征在于，所述胚性誘導培養基由每升MS培養基中添加0.8-1.2mg TDZ、0.018-0.22mg ZT、28-32g蔗糖、6.8-7.2g瓊脂制成，所述胚性誘導培養基的pH為5.6-6.0，所述預培養基由每升MS培養基中添加2.8-3.2mg2,4-D、0.18-0.22mg TDZ、28-32g蔗糖、6.8-7.2g瓊脂制成，所述預培養基的pH為5.6-6.0。

5.根據權利要求4所述的五味子體細胞胚的培養方法，其特征在于，所述預培養是在溫度為23-27℃條件下，黑暗培養28-30d；所述胚性誘導培養的條件是：溫度為23-27℃、光周期為15-17h、培養時間為28-30d。

6.根據權利要求1所述的五味子體細胞胚的培養方法，其特征在于，按質量體積比為10-15：1的比例，將所述五味子胚性愈傷組織接種至所述體細胞胚誘導培養基中。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的五味子體細胞胚的培養方法，其特征在于，所述五味子外植體為0.4-0.5cm長的五味子莖段。

8.一種用于培養五味子體細胞胚的培養基，其特征在于，其是由每升1/2 MS培養基中添加0.45-0.52mg BA、28-32g碳源以及0.4-0.6g氮源制成的體細胞胚誘導培養基，所述體細胞胚誘導培養基的pH為5.6-6.0，所述碳源是選自葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖以及山梨醇中的任意一種，所述氮源是選自椰汁、酵母提取物、水解酪蛋白以及水解乳蛋白中的任意一種。