[發明專利]一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法

在審

• 申請號: 201611102319.0
• 申請日: 2016-12-05
• 公開（公告）號: CN108148825A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 張玲;陳忠永
• 申請（專利權）人: 漳州市皓康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/26
• 分類號: C12N9/26;C12N9/18;C12N9/88;C12N9/24;C08B37/06;C12R1/685;C12R1/69;C12R1/80
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本發明公開了一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法，包括以下步驟：1)富集：取1～5g柑橘園土樣加入裝有50～100ml富集培養基的三角瓶中；2)篩選：取富集后的培養液多份，將稀釋后不同濃度的菌懸液分別涂布于初篩平板上；從初篩平板上挑取形態不同的菌落，在PDA斜面培養基中劃線，做好記號，進行保種；從斜面上挑取孢子或菌絲接種到不同的發酵培養基中，搖瓶發酵，取發酵液，測定發酵液中的原果膠酶酶活，篩選出酶活最高的菌株；3)酶液制備：將篩出的菌株接種至優化培養基中，取所得的培養物，離心處理，得到的上清液即為原果膠酶液，采用本發明制備的復合酶液進行果膠提取，果膠幾乎沒有降解，能夠降低環境污染。

技術領域

本發明涉及生物發酵技術領域，具體為一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法。

背景技術

柑橘無論是鮮食還是加工，皮是其主要副產物，約占果實重的20％～40％，皮中的果膠含量達20％～30％，是商品化果膠的重要原料。從柑橘皮中提取果膠不僅具有很大的經濟價值，而且對提高柑橘資源的綜合利用率，減少環境污染，保持我國柑橘產業的可持續發展具有重大意義。果膠是食品工業上重要的食品添加劑，需求量逐年遞增。商品化的果膠主要還是以酸提法為主，但該方法具有諸多不足。殘渣分離困難，設備易被腐蝕，能源消耗很大，同時還產生大量酸性廢棄物對環境造成污染等。目前，提取果膠的物理方法主要有，超聲波法、高壓滅菌法、壓榨法和亞臨界水萃取法等，物理法比較簡單高效，但能耗高，難以工業化應用。

酶法提果膠也得到了普遍的關注，酶法提果膠反應條件溫和，污染低，而且能耗小。微生物酶法提取果膠的研究越來越多，但得到的果膠的產率和質量還需要進一步提高。但目前報道的酶法得到的果膠的質量差、提取率低，故尋找一種能夠高效提取果膠的酶勢在必行。原果膠的降解是多種酶共同作用的結果，主要包括內切聚半乳糖醛酸酶、果膠(酸)裂解酶、果膠甲酯酶、聚阿拉伯糖苷酶和聚鼠李半乳糖醛酸酶。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法，包括以下步驟：

1)富集：取1～5g柑橘園土樣加入裝有50～100ml富集培養基的三角瓶中，富集培養24～48h，溫度為30℃，轉速為200r/min；

2)篩選：取富集后的培養液多份，分別稀釋為10^-3～10^-5，將稀釋后不同濃度的菌懸液分別涂布于初篩平板上，培養2～5天，溫度為30～37℃；從初篩平板上挑取形態不同的菌落，在PDA斜面培養基中劃線，做好記號，進行保種，培養2～5天，溫度為30～37℃；從斜面上挑取孢子或菌絲接種到不同的發酵培養基中，搖瓶發酵24～48h，溫度為30～37℃，轉速為200r/min，取發酵液，測定發酵液中的原果膠酶酶活，篩選出酶活最高的菌株；

3)酶液制備：將篩出的菌株接種至優化培養基中，優化培養基(g/l)的組分及配比為：柑橘皮渣25～33、硝酸鈉2～5、氯化鉀0.1～0.5、磷酸氫二鉀0.5～2、七水硫酸鎂0.5～1.0、七水硫酸亞鐵0.01～0.05，余量為蒸餾水，培養條件：裝液量為50～100ml/250ml，接種量為2～5％，溫度為25～35℃，轉速為200～400r/min，培養時間為24～72h，取所得的培養物，在0～4℃、8000～12000r/min轉速條件下，離心5～10min，得到的上清液即為原果膠酶液，將原果膠酶液在-20℃條件下低溫保存。

優選的，所述步驟1)中的富集培養基的組分為酵母提取物、蛋白胨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、氯化鉀、氯化鈣。

優選的，所述步驟2)中篩選出的菌株為曲霉屬或青霉屬菌株。