[發(fā)明專利]一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611102319.0
• 申請(qǐng)日: 2016-12-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108148825A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張玲;陳忠永
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 漳州市皓康生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/26
• 分類號(hào): C12N9/26;C12N9/18;C12N9/88;C12N9/24;C08B37/06;C12R1/685;C12R1/69;C12R1/80
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• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)富集：取1～5g柑橘園土樣加入裝有50～100ml富集培養(yǎng)基的三角瓶中，富集培養(yǎng)24～48h，溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為200r/min；

2)篩選：取富集后的培養(yǎng)液多份，分別稀釋為10^-3～10^-5，將稀釋后不同濃度的菌懸液分別涂布于初篩平板上，培養(yǎng)2～5天，溫度為30～37℃；從初篩平板上挑取形態(tài)不同的菌落，在PDA斜面培養(yǎng)基中劃線，做好記號(hào)，進(jìn)行保種，培養(yǎng)2～5天，溫度為30～37℃；從斜面上挑取孢子或菌絲接種到不同的發(fā)酵培養(yǎng)基中，搖瓶發(fā)酵24～48h，溫度為30～37℃，轉(zhuǎn)速為200r/min，取發(fā)酵液，測(cè)定發(fā)酵液中的原果膠酶酶活，篩選出酶活最高的菌株；

3)酶液制備：將篩出的菌株接種至優(yōu)化培養(yǎng)基中，優(yōu)化培養(yǎng)基(g/l)的組分及配比為：柑橘皮渣25～33、硝酸鈉2～5、氯化鉀0.1～0.5、磷酸氫二鉀0.5～2、七水硫酸鎂0.5～1.0、七水硫酸亞鐵0.01～0.05，余量為蒸餾水，培養(yǎng)條件：裝液量為50～100ml/250ml，接種量為2～5％，溫度為25～35℃，轉(zhuǎn)速為200～400r/min，培養(yǎng)時(shí)間為24～72h，取所得的培養(yǎng)物，在0～4℃、8000～12000r/min轉(zhuǎn)速條件下，離心5～10min，得到的上清液即為原果膠酶液，將原果膠酶液在-20℃條件下低溫保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法，其特征在于：所述步驟1)中的富集培養(yǎng)基的組分為酵母提取物、蛋白胨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、氯化鉀、氯化鈣。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法，其特征在于：所述步驟2)中篩選出的菌株為曲霉屬或青霉屬菌株。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法，其特征在于：步驟3)中的優(yōu)化培養(yǎng)基(g/l)的組分及配比為：柑橘皮渣26.3、硝酸鈉3.3、氯化鉀0.1、磷酸氫二鉀0.5、七水硫酸鎂0.5、七水硫酸亞鐵0.01，余量為蒸餾水，培養(yǎng)條件：裝液量為50ml/250ml，接種量為2％，溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為200r/min，培養(yǎng)時(shí)間為36h。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法，其特征在于：步驟3)中的優(yōu)化培養(yǎng)基(g/l)的組分及配比為：柑橘皮渣28.6、硝酸鈉2.5、氯化鉀0.2、磷酸氫二鉀0.7、七水硫酸鎂0.7、七水硫酸亞鐵0.01，余量為蒸餾水，培養(yǎng)條件：裝液量為75ml/250ml，接種量為1.5％，溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為200r/min，培養(yǎng)時(shí)間為72h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法，其特征在于：所述步驟2)中的菌懸液直接由腐爛水果的腐爛部分用無(wú)菌水浸泡后得到。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法，其特征在于：所述腐爛水果為腐爛的橙子，步驟2)中篩選出的菌株為青霉菌株，步驟3)中的優(yōu)化培養(yǎng)基(g/l)的組分及配比為：柑橘皮渣30.6、硝酸鈉2.2、氯化鉀0.5、磷酸氫二鉀2、七水硫酸鎂0.5、七水硫酸亞鐵0.01，余量為蒸餾水；培養(yǎng)條件：裝液量為50ml/250ml，接種量為4.5％，溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為300r/min，培養(yǎng)時(shí)間為60h。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于提取果膠的原果膠酶制備方法，其特征在于：所述腐爛水果為腐爛的蘆柑，步驟2)中篩選出的菌株為黑曲霉菌株，步驟3)中的優(yōu)化培養(yǎng)基(g/l)的組分及配比為：柑橘皮渣30.1、硝酸鈉3.5、氯化鉀0.2、磷酸氫二鉀0.55、七水硫酸鎂0.75、七水硫酸亞鐵0.02，余量為蒸餾水；培養(yǎng)條件：裝液量為75ml/250ml，接種量為2％，溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為200r/min，培養(yǎng)時(shí)間為48h。