[發(fā)明專利]一種NADPH的分離純化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611089629.3
• 申請(qǐng)日: 2016-12-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108132318B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦正紅;孫瑋;朱鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東藍(lán)康藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/89
• 代理公司: 北京三聚陽(yáng)光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11250
• 代理人: 張倩倩;李敏

本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種NADPH的分離純化方法。該分離純化方法，包括以下步驟：將NADPH粗品溶液過(guò)濾，得供試品溶液；將所述供試品溶液通過(guò)反相柱層析純化，梯度洗脫，HPLC檢測(cè)，收集，濃縮，干燥，即得。本發(fā)明通過(guò)優(yōu)化選擇反相柱層析的介質(zhì)、色譜柱、流動(dòng)相、梯度洗脫的步驟等，使得NADPH的分離純化的周期大大縮短(3小時(shí)即可完成分離純化過(guò)程)，收率較高(約50％)，純度較高(92％)，適于NADPH的工業(yè)化生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種NADPH的分離純化方法。

背景技術(shù)

NADPH即還原型輔酶，學(xué)名：還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(triphosphopyridine nucleotide)，是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)中與腺嘌呤相連的核糖環(huán)系2'-位的磷酸化衍生物，在很多生物體內(nèi)的化學(xué)反應(yīng)中起遞氫體的作用，并且參與多種代謝反應(yīng)的合成，如脂類、脂肪酸和核苷酸的合成，還可以在暗反應(yīng)中為二氧化碳的固定進(jìn)行供能。在上述反應(yīng)中， NADPH是NADP+的還原形式，NADPH的作用是還原劑和氫負(fù)離子的供體；同時(shí)，NADPH是細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)的重要組成成分，在細(xì)胞防御活性氧(ROS)損傷方面起著重要的作用。

有文獻(xiàn)報(bào)道，細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂、分化、遷移、凋亡及衰老等許多生命活動(dòng)，也與NADPH密切相關(guān)；而且，維持NADPH(NADH)的固定濃度，或者外加輔助的NADPH(NADH)，可以對(duì)抗細(xì)胞的凋亡和衰老過(guò)程，延緩機(jī)體衰老。最新的研究發(fā)現(xiàn)，NADPH和NADH在機(jī)體生理與病理?xiàng)l件下都發(fā)揮重要的功能。當(dāng)前，對(duì)細(xì)胞內(nèi)NADPH(NADH)作用和代謝的研究已成為國(guó)際性的研究熱點(diǎn)。

近幾年，人工合成NADPH、然后進(jìn)行分離純化是NADPH的重要來(lái)源之一。然而，現(xiàn)有的對(duì)人工合成的NADPH粗品進(jìn)行分離純化方法，由于分離純化周期較長(zhǎng)、使得在分離純化中NADPH極易發(fā)生氧化，而且分離純化得到的NADPH純度也較低。

因此，在不造成NADPH損失和破壞的前提下，研究一種操作步驟簡(jiǎn)便、分離純化周期短、適于工業(yè)化生產(chǎn)的NADPH的分離純化方法具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是由于現(xiàn)有的NADPH的分離純化周期較長(zhǎng)、使得NADPH在分離純化中發(fā)生氧化的問(wèn)題，本發(fā)明要解決的第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題是現(xiàn)有的分離純化得到的NADPH純度較低的問(wèn)題。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提出一種分離純化周期較短、分離純化得到的NADPH純度較高的NADPH的分離純化方法。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明提供一種NADPH的分離純化方法，包括以下步驟：

將NADPH粗品溶液過(guò)濾，得供試品溶液；將所述供試品溶液通過(guò)反相柱層析純化，梯度洗脫，HPLC檢測(cè)，收集，濃縮，干燥，即得。

優(yōu)選地，本發(fā)明上述NADPH的分離純化方法，

所述反相柱層析的介質(zhì)為C18，顆粒度為10-100μm，粒徑為

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述NADPH的分離純化方法，

所述反相柱層析的色譜柱為Sepax GP-C18。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述NADPH的分離純化方法，

以8～12mM NaH₂PO₄緩沖液為流動(dòng)相A，以體積分?jǐn)?shù)為100％的甲醇為流動(dòng)相B。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述NADPH的分離純化方法，

以10mM NaH₂PO₄緩沖液為流動(dòng)相A，以甲醇為流動(dòng)相B。