[發(fā)明專利]一種NADPH的分離純化方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201611089629.3 | 申請日： | 2016-12-01 |
| 公開（公告）號： | CN108132318B | 公開（公告）日： | 2021-03-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 秦正紅;孫瑋;朱鵬 | 申請（專利權(quán)）人： | 山東藍康藥業(yè)股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/06 | 分類號： | G01N30/06;G01N30/89 |
| 代理公司： | 北京三聚陽光知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11250 | 代理人： | 張倩倩;李敏 |
| 地址： | 255400 山東省淄*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 nadph 分離 純化 方法 | ||
1.一種NADPH的分離純化方法，其特征在于，包括以下步驟：
將NADPH粗品溶液過濾，得供試品溶液；將所述供試品溶液通過反相柱層析純化，梯度洗脫，HPLC檢測，收集，濃縮，干燥，即得；
所述反相柱層析的介質(zhì)為C18，顆粒度為10-100μm，粒徑為色譜柱為Sepax GP-C18，以8～12mM NaH2PO4緩沖液為流動相A，以體積分數(shù)為100％的甲醇為流動相B，柱溫為15℃，流速為40mL/min，檢測波長為260nm，
所述梯度洗脫的具體程序為：0-10min，A：B的體積比為95％：5％；10-40min，A：B的體積比為90％：10％；40-60min，A：B的體積比由90％：10％→40％：60％；60min，A：B的體積比為60％：40％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的NADPH的分離純化方法，其特征在于，
以10mM NaH2PO4緩沖液為流動相A，以甲醇為流動相B。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的NADPH的分離純化方法，其特征在于，
所述梯度洗脫前還包括以下步驟：先用體積分數(shù)為100％的甲醇進行活化洗脫30min，再用A：B的體積比為95％：5％的流動相進行平衡洗脫35min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的NADPH的分離純化方法，其特征在于，
以重量百分含量計，所述NADPH粗品溶液中，主要含有以下成分：NADPH的含量為60～70％，NADP的含量為10～20％，葡萄糖的含量為10～15％，未知雜質(zhì)的含量為5-10％。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的NADPH的分離純化方法，其特征在于，
以重量百分含量計，所述NADPH粗品溶液中，主要含有以下成分：NADPH的含量為60～70％，NADP的含量為10～20％，葡萄糖的含量為10～15％，未知雜質(zhì)的含量為5-10％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2或5中任一項所述的NADPH的分離純化方法，其特征在于，采用0.45μm微孔濾膜進行過濾。
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