[發明專利]一種panD突變基因、編碼蛋白、載體、工程菌及其應用

有效

• 申請號: 201611086457.4
• 申請日: 2016-11-30
• 公開（公告）號: CN106754845B
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 余志良;裘娟萍;王姍姍
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12P13/06
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種panD突變基因，其特征在于所述panD突變基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6之一所示。

2.一種權利要求1所述panD突變基因構建的重組載體。

3.一種權利要求2所述重組載體轉化制備的重組基因工程菌。

4.一種權利要求1所述panD突變基因在生物法制備β-丙氨酸中的應用。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述應用以含panD突變基因的重組基因工程菌經發酵培養獲得的濕菌體為酶源，以L-天冬氨酸為底物，以pH值為6～8的水為反應介質構成反應體系，于25～80℃，50～250rpm搖床轉化12～72h，轉化液分離純化，獲得β-丙氨酸。

6.如權利要求5所述應用，其特征在于所述濕菌體用量以反應體系體積計為2～50g/L，所述底物終濃度以反應體系體積計為0.01～5mol/L。

7.如權利要求5所述應用，其特征在于所述酶源按如下步驟制備：(1)斜面培養：將含panD突變基因的重組基因工程菌接種于斜面培養基，20～37℃培養12～24h，獲得斜面菌體；所述斜面培養基終濃度組成為：酵母膏1～10g/L，蛋白胨2～15g/L，瓊脂15～25g/L，pH6～8，溶劑為水；(2)種子培養：從斜面菌體挑取一接種環菌株接種至種子培養基，20～37℃、100～250rpm搖床培養12～36h，獲得種子液；所述種子培養基終濃度組成為：酵母膏1～10g/L，蛋白胨2～15g/L，pH6～8，溶劑為水；(3)發酵培養：將種子液以體積濃度1～10％的接種量接種至發酵培養基，20～37℃、100～250rpm搖床培養至OD₆₀₀為0.2～1.0，加乳糖至終濃度2～5g/L，繼續培養4～48h，獲得發酵液，將發酵液在5000～12000rpm離心2～10min后，棄去上清，收集濕菌體，獲得所述酶源；所述發酵培養基終濃度組成為：酵母膏1～10g/L，蛋白胨2～15g/L，pH6～8，溶劑為水。