[發明專利]果蠅細胞瞬時轉染的工藝

有效

• 申請號: 201611082416.8
• 申請日: 2016-11-30
• 公開（公告）號: CN106755093B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 沈瀟;林興華;林澤斌;景濤
• 申請（專利權）人: 佛山漢騰生物科技有限公司;廣州漢騰生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中

本發明涉及一種果蠅細胞瞬時轉染的工藝，其包括如下步驟：向果蠅細胞懸液中加入轉染試劑和含目的DNA的質粒進行瞬時轉染，所述轉染試劑為陽離子聚合物PEI，所述轉染試劑的添加量為0.8～3.2μg/10⁶個果蠅細胞，所述含目的DNA的質粒的添加量為0.2～1.4μg/10⁶個果蠅細胞；培養得到轉染有含目的DNA的質粒的果蠅細胞。該果蠅細胞瞬時轉染的工藝操作簡單，所用的轉染試劑成本低，轉染迅速。該果蠅細胞瞬時轉染的工藝通過操作簡單的瞬時轉染技術在果蠅細胞中可以以較短的時間實現低成本、高產量的目的DNA表達，并且能將該工藝應用至較大規模的工業生產中，克服了昆蟲細胞難以通過瞬時轉染工藝進行重組蛋白產業化生產的技術難題。

技術領域

本發明涉及生物工程領域，尤其是涉及一種果蠅細胞瞬時轉染的工藝。

背景技術

昆蟲細胞表達系統已被廣泛用于包括組織因子和抗體等在內的眾多人類重組蛋白的表達(Kosr等，1997)。果蠅S2(Drosophila Schneider 2)細胞源自果蠅胚胎晚期階段，在90年代開始用于商業用途，主要是通過轉染特定質粒篩選出轉染細胞池，并進一步獲得細胞系來進行蛋白表達。該技術是桿狀病毒表達載體系統(BEVS)的重要可替代技術，已經成功應用于具有活性的受體蛋白、離子通道、細胞骨架蛋白、轉錄調控因子、激素和凝血因子等的表達(Millar等人，1995；Millar等人，1994；Tota等人，1995；Towers和Sattelle，2002；Mennella等人，2005；Winslow等人，1989；Chang等人，2005；Zomra等人，2007；Vatandoost等人，2012)，且相對于BVES其受重組哺乳動物蛋白過表達的影響更小(Percival等人，1997；Prosise等人，2004)。然而該技術受到了飼養層細胞應用及高成本血清的限制，且整個過程歷時數月而產量只能達到幾mg/L(Drugmand等人，2012)。近年來基于非病毒質粒載體的瞬時轉染技術(TGE)已建立并成功進行哺乳動物細胞核糖體蛋白的快速表達(Geisse，2009；Hopkins等人，2012)。基于昆蟲細胞的TGE技術也已引入(Loomis等人，2005；Shen等人，2013)，但目前由于并沒有經過工藝優化的高效的TGE操作規程，導致基于TGE技術的昆蟲細胞蛋白表達產量不能達到預期效果，限制了TGE技術在昆蟲細胞中的應用。

發明內容

基于此，有必要提供一種成本低且有利于提高重組蛋白的表達產率的果蠅細胞瞬時轉染的工藝。

一種果蠅細胞瞬時轉染的工藝，包括如下步驟：

向果蠅細胞懸液中加入轉染試劑和含目的DNA的質粒進行瞬時轉染，所述轉染試劑為陽離子聚合物PEI(聚醚酰亞胺)，所述轉染試劑的添加量為0.8～3.2μg/10⁶個果蠅細胞，所述含目的DNA的質粒的添加量為0.2～1.4μg/10⁶個果蠅細胞；

培養得到轉染有含目的DNA的質粒的果蠅細胞。

在其中一個實施例中，所述果蠅細胞懸液為果蠅S2細胞懸液。

在其中一個實施例中，所述果蠅細胞懸液的密度為5×10⁶～100×10⁶個果蠅細胞/mL。

在其中一個實施例中，所述陽離子聚合物的分子量為20～50KD。

在其中一個實施例中，還包括在所述瞬時轉染之前對果蠅細胞傳代培養的步驟，傳代培養時接種的密度為0.5×10⁶～2×10⁶個果蠅細胞/mL。

在其中一個實施例中，傳代培養所用的培養基選自Sf900II SFM培養基、Sf900IIISFM培養基、ESF AF培養基、Schneider’s Drosophila培養基、ExpreS2無動物成分培養基、InsectXpress培養基或SF-4Baculo Express ICM培養基。