[發明專利]果蠅細胞瞬時轉染的工藝

有效

• 申請號: 201611082416.8
• 申請日: 2016-11-30
• 公開（公告）號: CN106755093B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 沈瀟;林興華;林澤斌;景濤
• 申請（專利權）人: 佛山漢騰生物科技有限公司;廣州漢騰生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中

1.一種果蠅細胞瞬時轉染的工藝，其特征在于，包括如下步驟：

對果蠅細胞傳代培養，傳代培養時接種的密度為0.5×10⁶～2×10⁶個果蠅細胞/mL；

向果蠅細胞懸液中加入轉染試劑和含目的DNA的質粒進行瞬時轉染，所述果蠅細胞懸液為果蠅S2細胞懸液，所述果蠅細胞懸液的密度為5×10⁶～100×10⁶個果蠅細胞/mL，所述轉染試劑為陽離子聚合物PEI，所述轉染試劑的添加量為0.8～3.2μg/10⁶個果蠅細胞，所述含目的DNA的質粒的添加量為0.2～1.4μg/10⁶個果蠅細胞，所述含目的DNA的質粒為非病毒質粒；

培養得到轉染有含目的DNA的質粒的果蠅細胞；

其中，所述陽離子聚合物PEI的分子量為20～50KD。

2.如權利要求1所述的果蠅細胞瞬時轉染的工藝，其特征在于，所述陽離子聚合物PEI的分子量為25KD。

3.如權利要求1～2中任一項所述的果蠅細胞瞬時轉染的工藝，其特征在于，傳代培養時接種的密度為1×10⁶個果蠅細胞/mL。

4.如權利要求3所述的果蠅細胞瞬時轉染的工藝，其特征在于，傳代培養所用的培養基選自Sf900 II SFM培養基、Sf900 III SFM培養基、ESF AF培養基、Schneider’sDrosophila培養基、ExpreS2無動物成分培養基、InsectXpress培養基或SF-4BaculoExpress ICM培養基。

5.如權利要求4所述的果蠅細胞瞬時轉染的工藝，其特征在于，傳代培養過程中，是于25～32℃、180～400rpm的轉速進行搖晃培養。

6.如權利要求5所述的果蠅細胞瞬時轉染的工藝，其特征在于，在傳代培養一段時間細胞達到對數生長期后，離心收集細胞，再使用所述培養基重懸至密度為5×10⁶～100×10⁶個果蠅細胞/mL用作瞬時轉染。

7.如權利要求1～2及4～6中任一項所述的果蠅細胞瞬時轉染的工藝，其特征在于，還包括在瞬時轉染后0.5～3小時，將轉染后的細胞稀釋至濃度為2×10⁶～15×10⁶個果蠅細胞/mL，并轉移至培養裝置中，在25～32℃、180～400rpm的轉速條件下進行搖晃培養的步驟。