[發明專利]用于鑒定人參是否經過硫磺熏蒸的含硫化合物及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201611077557.0
• 申請日: 2016-11-30
• 公開（公告）號: CN106589041B
• 公開（公告）日: 2019-03-05
• 發明（設計）人: 沈紅;李松林;張麗
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫藥研究院
• 主分類號: C07J31/00
• 分類號: C07J31/00;G01N30/02;G01N30/74
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 楊海軍

1.用于鑒定人參是否經過硫磺熏蒸的含硫化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

取硫磺熏蒸人參采用體積濃度為70～80％乙醇回流提取1～3次，每次1～2小時，合并得提取液，濃縮，濃縮液采用陰離子交換樹脂、D101大孔樹脂、70％乙醇沉淀或正丁醇萃取方法純化，純化提取物運用高分辨質譜實時追蹤含硫化合物，然后采用制備液相和分析液相分離得到化合物為25-烯，24-磺酸人參皂苷Rg1和25-烯，24-磺酸人參皂苷Re；

所述的陰離子交換樹脂純化方法包括：取人參提取濃縮液，上陰離子離子交換柱，然后分別用超純水、濃度0.1M甲酸溶液洗脫，收集0.1M甲酸洗脫溶液，減壓濃縮；

所述的D101大孔樹脂純化方法包括：取人參提取濃縮液，離心，取上清液經D101大孔樹脂柱，上樣后依次用水、體積濃度50％乙醇和95％乙醇洗脫，收集體積濃度50％乙醇洗脫部位，減壓濃縮；

(1)第一次制備液相分離方法為：

取純化提取物用制備液相分離，具體的制備液相分離條件為：Waters PrepLC_150系統，Waters 2424 ELSD檢測器；色譜柱：SunFire^TMPrep C18 OBD^TM；流動相：水和乙腈，梯度洗脫程序如下：0–40min時，5-80％體積比的乙腈,40–42min時，80-100％體積比的乙腈；流速為7mL/min；進樣量：400μl。按保留時間收集流出液，收集時間為12:30～16min的流出液，減壓濃縮，冷凍干燥得粉末備用；

(2)第二次制備液相分離方法為：

取第一次制備液相分離所得粉末用甲醇溶解，進行第二次制備液相分離，制備液相分離條件為：Waters PrepLC_150系統，Waters 2424 ELSD檢測器；色譜柱：SunFire^TMPrepC₁₈OBD^TM；流動相：體積比為82:18的0.1％甲酸和乙腈，流速為7mL/min；進樣量：200μl，收集1、2、3、4、5、6和7號色譜峰，收集后用NaOH調pH至中性，并將7號峰收集液減壓濃縮并冷凍干燥，備用；

(3)分析液相分離方法為：

應用UPLC-Q/TOF-MS對步驟(2)的峰7成分進一步色譜分離，以指導后續HPLC分離，色譜條件為：Waters ACQUITY UPLC^TM系統，色譜柱Waters Acquity HSS T3；梯度洗脫，A相為乙腈，B相為0.1％甲酸溶液，洗脫程序：0-1min時2％A,1～2min時2～5％A,2–5min時5～12％A，5–10min時12～20％A，流速0.4mL/min；

然后應用ACQUITY UPLC Columns Calculator軟件，進行UPLC-HPLC色譜條件的轉化，取步驟(2)7號峰干燥物，用HPLC分離的色譜條件為：Waters 2695系統，Alltech 2000 ELSD檢測器，色譜柱Waters XSelsct HSS T3；流動相A：乙腈；B：0.1％甲酸溶液，梯度洗脫，洗脫程序：0-3min時2％A,3–5min時2-5％A,5–11min時5-12％A，11-19min時12-18.4％A，流速1mL/min；收集峰1、2，分別得到化合物為25-烯，24-磺酸人參皂苷Rg1和25-烯，24-磺酸人參皂苷Re；

所述的化合物25-烯，24-磺酸人參皂苷Rg1的結構式為：

25-烯，24-磺酸人參皂苷Re的結構式為：