[發(fā)明專利]一種山葡萄愈傷組織培養(yǎng)基及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611075162.7
• 申請日: 2016-11-28
• 公開（公告）號: CN106359108B
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙瀅;艾軍;楊義明;張慶田;秦紅艷;張寶香;王振興;范書田;劉迎雪;王廣富;許培磊
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳開磊

1.一種耐鹽高白蘆藜醇山葡萄愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)將山葡萄的展葉新梢剪成小段，清洗并消毒；

2)將所述小段的葉片剪裁至適合培養(yǎng)的大小后作為外植體接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；

3)25-30天后，將誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)移到繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；

4)25-30天后，取繼代愈傷組織，切割成小塊后接種至耐鹽繼代培養(yǎng)基上；

5)18-23天后，取新生長出的愈傷組織，切割成小塊后接種至新的耐鹽繼代培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)；

6)重復(fù)步驟5)3-4次后，得到耐鹽愈傷組織，將所述耐鹽愈傷組織接種至擴(kuò)增培養(yǎng)基上培養(yǎng)；

其中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、所述繼代培養(yǎng)基和所述擴(kuò)增培養(yǎng)基均為山葡萄愈傷組織培養(yǎng)基，所述山葡萄愈傷組織培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加蔗糖、瓊脂、6-芐氨基腺嘌呤和生長素類似物；其中，所述生長素類似物選自萘乙酸、吲哚丁酸和2,4-二氯苯氧乙酸中的任意一種，所述培養(yǎng)基中各添加物的加入量如下：

蔗糖25-35g/L；

瓊脂4-8g/L；

6-芐氨基腺嘌呤1.5-2.5mg/L；

生長素類似物0.05-0.2g/L；

所述耐鹽繼代培養(yǎng)基為所述山葡萄愈傷組織培養(yǎng)基中添加了按質(zhì)量百分比計1-1.5％的無機(jī)鹽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述生長素類似物是2,4-二氯苯氧乙酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述山葡萄愈傷組織培養(yǎng)基的pH＝5.5-6.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述消毒使用0.1％的升汞作為消毒劑，消毒時間為30-240s，消毒完成后使用無菌水沖洗。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述消毒時間為50-70s。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中將葉片剪裁成0.5-2cm見方的小塊。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，將葉片剪裁成0.9-1.1cm見方的小塊。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述步驟4)和5)中，將愈傷組織切割成0.4-0.6cm見方的小塊。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述無機(jī)鹽是NaCl和/或KCl。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述無機(jī)鹽是NaCl。

11.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、所述繼代培養(yǎng)基和所述擴(kuò)增培養(yǎng)基的組分及配比完全相同；所述耐鹽繼代培養(yǎng)基除含有無機(jī)鹽外，其余組分與配比與所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、所述繼代培養(yǎng)基和所述擴(kuò)增培養(yǎng)基完全相同。

12.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述山葡萄的品種為“左優(yōu)紅”、“北冰紅”和“雙紅”中的一種。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述山葡萄品種是“雙紅”。