[發(fā)明專利]一種山葡萄愈傷組織培養(yǎng)基及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611075162.7
• 申請日: 2016-11-28
• 公開（公告）號: CN106359108B
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙瀅;艾軍;楊義明;張慶田;秦紅艷;張寶香;王振興;范書田;劉迎雪;王廣富;許培磊
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳開磊

本發(fā)明提供了一種山葡萄愈傷組織培養(yǎng)基，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)添加蔗糖、瓊脂、6?芐氨基腺嘌呤和生長素類似物；生長素類似物選自萘乙酸、吲哚丁酸和2,4?二氯苯氧乙酸中的一種。本發(fā)明還提供了使用該培養(yǎng)基進(jìn)行耐鹽山葡萄愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法：將山葡萄的展葉新梢的葉片剪裁后作為外植體接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，后將誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)移到繼代培養(yǎng)基，后取繼代愈傷組織，切成小塊后接種至耐鹽繼代培養(yǎng)基，后取新生長出的愈傷組織，切成小塊后接種至新的耐鹽繼代培養(yǎng)基，重復(fù)3?4次得到耐鹽愈傷組織，將其接種至擴(kuò)增培養(yǎng)基。HPLC測定結(jié)果表明耐鹽愈傷組織白藜蘆醇含量為1580μg/g顯著高于對照的505μg/g，約為對照的3倍。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物培養(yǎng)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種山葡萄愈傷組織培養(yǎng)基及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

在有限的耕地面積下，開發(fā)利用鹽荒地成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。山葡萄作為東北地區(qū)葡萄酒釀造工業(yè)的主要原料，在栽植過程中同樣面臨土壤鹽漬化適應(yīng)的難題。例如，吉林西部地區(qū)優(yōu)良?xì)夂驐l件非常有利于山葡萄糖分的積累及葡萄酒品質(zhì)的提升，但該地區(qū)土壤鹽漬化程度高，極大限制了優(yōu)良山葡萄資源的栽培推廣。因此，選育耐鹽作物品種目前已成為開發(fā)利用鹽堿荒地的關(guān)鍵。

植物愈傷組織作為未分化的細(xì)胞團(tuán)，具有脫分化和再分化潛力，是植物細(xì)胞生物學(xué)、植物胚胎學(xué)、發(fā)育和分子生物學(xué)等研究的良好基礎(chǔ)平臺，又由于愈傷組織通常具有生長迅速、繁殖量大、占用空間小、能夠在控制條件下進(jìn)行工廠化生產(chǎn)的優(yōu)越性和特點(diǎn)，可作為醫(yī)藥生物反應(yīng)器加以應(yīng)用，同時愈傷細(xì)胞還是良種、種質(zhì)保存的理想途徑。近年來通過篩選耐鹽愈傷組織并再生植株，已成為選育耐鹽品種的重要手段。其中鹽濃度的確定是進(jìn)行耐鹽細(xì)胞篩選的關(guān)鍵。若選擇壓力過高則可能殺死變異的細(xì)胞，若選擇壓力過低則會增加獲得假陽性變異細(xì)胞的幾率。因此，需要確定一個適宜的臨界鹽濃度來篩選耐鹽愈傷組織。

山葡萄作為木本植物，愈傷組織誘導(dǎo)具有的一定難度，而有關(guān)適宜臨界鹽濃度的篩選及耐鹽山葡萄細(xì)胞團(tuán)的獲得目前也未見研究報道。有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種山葡萄愈傷組織培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基通過6-芐氨基腺嘌呤和添加生長素類似物促進(jìn)愈傷組織的形成和生長，可以用于進(jìn)行山葡萄愈傷組織的初代、繼代以及擴(kuò)增培養(yǎng)。

本發(fā)明的第二目的在于提供使用所述培養(yǎng)基進(jìn)行耐鹽山葡萄愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)，本方法通過在本發(fā)明的培養(yǎng)基上進(jìn)行初代和繼代的山葡萄愈傷組織培養(yǎng)后，使用添加了無機(jī)鹽的培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)篩選，得到耐鹽的山葡萄愈傷組織,該耐鹽愈傷組織的白藜蘆醇含量高。白藜蘆醇是一種重要的營養(yǎng)物質(zhì)，具有抗氧化功能。

本發(fā)明提供了一種耐鹽、高白藜蘆醇含量的山葡萄變異體誘導(dǎo)方法。研究中以山葡萄葉片外植體為材料誘導(dǎo)愈傷組織，以NaCl為選擇因子，并且分析了不同鹽濃度下愈傷組織中白藜蘆醇含量，最終在適宜的選擇壓下，對愈傷組織進(jìn)行定向直接篩選，從而獲得耐鹽且白藜蘆醇含量較高的山葡萄變異體，以便為優(yōu)異耐鹽山葡萄品種選育及生物反應(yīng)器研究提供基礎(chǔ)材料。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明的一個方面涉及一種山葡萄愈傷組織培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加蔗糖、瓊脂、6-芐氨基腺嘌呤和生長素類似物；其中，所述生長素類似物選自萘乙酸、吲哚丁酸和2,4-二氯苯氧乙酸中的任意一種。

優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基中各添加物的加入量如下：

蔗糖25-35g/L；

瓊脂4-8g/L；

6-芐氨基腺嘌呤1.5-2.5mg/L；

生長素類似物0.05-0.2g/L；

優(yōu)選地，所述生長素類似物是2,4-二氯苯氧乙酸。