[發明專利]一種以雞頭黃精鱗莖為外植體的種苗快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201611072907.4
• 申請日: 2016-11-29
• 公開（公告）號: CN106489740B
• 公開（公告）日: 2018-03-13
• 發明（設計）人: 郭生虎;朱永興;陳虞超;關雅靜;石磊;張農
• 申請（專利權）人: 寧夏農林科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00;A01G24/28;A01G24/25;A01G24/15
• 代理公司: 廣州市一新專利商標事務所有限公司44220
• 代理人: 張芳

技術領域

本發明涉及一種以雞頭黃精鱗莖為外植體的種苗快速繁殖方法。

背景技術

黃精(Polygonatum sibiricum Delar.ex Redoute)別名雞頭黃精、雞頭參，屬百合科(Liliaceae)黃精屬(Polygonatum)多年生草本植物，主要分布于寧夏六盤山地區，是藥食兼用的大宗中藥材，在我國已有2000多年的藥用歷史。黃精以干燥根莖入藥，味甘性平，用于胃陰不足，脾胃氣虛，體倦乏力，口干食少，肺虛燥咳，精血不足，癆嗽咳血，腰膝酸軟，須發早白，內熱消渴等功效(中華人民共和國藥典2010)。

隨著現代市場經濟的發展，對黃精藥理作用的認識不斷深入，黃精藥材的需求量不斷增加，同時對黃精多種功能的深入研究，天然保健與功能食品的開發研制，黃精的市場需求量逐年增加，采集野生黃精不但不能滿足市場需求，更破壞了生態環境和黃精野生資源。目前，黃精繁殖方式主要為有性繁殖(種子)和無性繁殖(根莖)兩種方式，采用根莖繁殖，品種更新速度慢、易感染病毒病，多代繁殖后品種退化嚴重；同時用種量大，每公頃需黃精2250kg，需要大量采挖野生黃精，對種源和環境破壞嚴重。采用種子繁殖，存在生長周期長(從播種到采收需4～5年)，且種子發芽、成苗率低等問題。無法大批量的生產種苗，常規繁殖方法已不適應黃精產業迅速發展的需求。組織培養技術是現代先進的植物離體繁殖技術，它不僅克服了種子繁殖中存在的諸多問題，還克服了常規無性繁殖速度慢、繁殖率低的缺點，且組織培養不受季節、氣候等因素制約，組織獲得的種苗生長均一，可以在室內穩定進行周年培養生產。

但目前還未見到關于雞頭黃精人工快速繁育的報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種以寧夏產雞頭黃精鱗莖為外植體的種苗快速繁殖方法，是一種高效、快捷的繁殖技術，短時期內即能夠實現規?；N苗生產，在一定程度解決了雞頭黃精種苗資源短缺的問題。

一種以雞頭黃精鱗莖為外植體的種苗快速繁殖方法，其特別之處在于，包括如下步驟：

(1)外植體的選擇與消毒：選擇秋季新鮮、成熟的當年生雞頭黃精鱗莖球，除去基部殘余的老根，先用流水沖洗30min，然后投到體積份數為2％的次氯酸鈉溶液中浸泡20min，再用清水沖洗干凈，接著轉入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用75％的乙醇浸泡20s，然后用無菌水沖洗3-4遍，再轉入0.1％的升汞溶液中浸泡8min，該升汞溶液每升含0.1mL吐溫20，然后用無菌水沖洗4-5次后備用；

(2)材料的處理：將即步驟(1)得到的的鱗莖球用無菌濾紙吸干表面的水分，在超凈工作臺內用刀刮去栓皮層，然后將鱗莖球先橫切為2塊，保留有萌動芽的上半部分，再將下半部分縱切為3-5mm的2塊，將這3塊鱗莖作為外植體備用；

(3)啟動培養：在無菌條件下將步驟(2)處理好的外植體接種到啟動培養基中，每瓶接種1塊，該培養基是在Ms培養基中額外添加了1.0mg/L～3.0mg/L的6-BA、0.5mg/L～1.0mg/L的NAA和10.0mg/L～20mg/L病毒唑，蔗糖30g/L，瓊脂粉5.0g/L，(用NaOH，下同)調整pH值為5.8，培養溫度18±1℃，置暗培養條件下培養12-15天，直至鱗莖膨大，切面少量愈傷化；

(4)鱗莖分化：將步驟(3)得到的培養的鱗莖整塊轉入鱗莖分化培養基，該鱗莖分化培養基以Ms培養基為基本培養基，額外添加細胞分裂素6-BA1.0mg/L～2.0mg/L、生長素NAA0.5mg/L～1.0mg/L和病毒唑5.0mg/L～10.0mg/L，蔗糖40.0g/L，瓊脂粉5.0g/L，調整pH值為5.8，培養溫度22±1℃，置光照培養箱中，每天光照14h，光照強度1500Lx～2000Lx，培養40-50天，直至從膨大的鱗莖塊周圍分化出小的鱗莖球；

(5)繼代增殖培養：切取步驟(4)誘導產生的小的鱗莖球，接種到鱗莖球增殖培養基上，該鱗莖球增殖培養基以Ms培養基為基本培養基，額外添加6-BA 0.5mg/L～1.0mg/L、NAA 0.1mg/L～0.5mg/L，蔗糖40g/L，瓊脂粉5.0g/L，pH值為5.8，培養溫度22±1℃，置光照培養箱中，每天光照14h，光照強度1500Lx～2000Lx，培養20-30天，直至部分小鱗莖球長出分蘗小苗，此時升高培養溫度至24±1℃，繼續培養15-20天，直至小鱗莖基部增殖出一簇一簇的小鱗莖球；