[發明專利]一種富含生長因子的殼聚糖可溶性紗布的制備方法

在審

• 申請號: 201611072659.3
• 申請日: 2016-11-28
• 公開（公告）號: CN106729955A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 單桂秋;林放;施琳穎;周謀
• 申請（專利權）人: 廣州軍區廣州總醫院
• 主分類號: A61L26/00
• 分類號: A61L26/00
• 代理公司: 佛山幫專知識產權代理事務所(普通合伙)44387
• 代理人: 胡麗琴

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種富含生長因子的殼聚糖可溶性紗布的制備方法。

背景技術

止血是緊急醫療救治的一個重要步驟，病人在手術治療過程、日常生活中出現突發性創傷時，均需進行快速的止血。手術過程中創面止血，及術后傷口的換藥是十分重要的環節，傳統的敷料如紗布、敷傷巾等，不僅吸附性差，抑菌作用、與機體的相容性、透氣、透濕等方面存在缺陷，創面肉芽組織容易長入敷料的網眼中，更換敷料時容易與創面的傷口粘連，損傷新生的肉芽組織和上皮組織，引起再次損傷和出血，加大了細菌感染的機率，不僅降低了傷口的愈合速度還會產生嚴重的并發癥，不僅增加了患者的痛苦，又增加患者的經濟負擔。

隨著醫療技術的發展，可溶性止血材料得到了廣泛關注。殼聚糖[(1，4)-2-氨基-2-脫氧-β-D葡聚糖]是甲殼素[(1，4)-2-乙酰氨基-2-脫氧-β-D葡聚糖]經堿處理脫去乙酰基而制成的天然生物多糖分子，是天然多糖中唯一的堿性氨基多糖。殼聚糖具有良好的生物相容性，可生物降解，可促進凝血和血栓的形成，能抑制多種細菌和真菌的生長，而且具有促進創傷組織再生、修復、愈合，易于形成凝膠，來源廣泛，價格低廉等優點。該類材料易于加工成型，適合作為敷料使用，成為新型醫用生物止血材料的研究熱點。

現在市場根據殼聚糖的生物特性，制成可溶性紗布，雖然抗菌性能優異，但成本很高，加重了病人的負擔。也有將殼聚糖制成凝膠，但孔徑在50μm左右，無法提供細胞生長和營養血管的空間，影響細胞分泌基質和營養物質的滲入，所以只適合皮膚表面的止血，無法滿足適合體內止血的要求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種富含生長因子的殼聚糖可溶性紗布的制備方法，在殼聚糖形成凝膠的基礎上，加入富血小板血漿(platelet-rich plasma)，制備一種富含生長因子的殼聚糖可溶性紗布，孔徑在130-160μm之間，內含大量的生長因子和豐富的纖維蛋白網絡，不僅易被人體吸收，無毒副作用，能抑制多種細菌和真菌的生長，為細胞生長提供了更多的結構空間，在體內、體外均可釋放各種生長因子，更利于組織的修復和血管重塑。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

一種富含生長因子的殼聚糖可溶性紗布的制備方法，包括如下步驟：

S1、按照重量比例稱取輔料配置血小板預處理液；

S2、制備血小板凍干緩沖液；

S3、制備預處理的富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)；

S4、配置羧甲基殼聚糖(carboxyethyl chitosan，CC)溶液；

S5、制備富含生長因子的殼聚糖可溶性紗布。

所述的輔料由包含以下重量份的原料組成：3.214gNaCl、0.157gKCl、0.078gCaCl₂、0.271gMgSO₄、2.604gNaHCO₃、0.714g檸檬酸、1.970g檸檬酸鈉、1.230g乙酸鈉、2.120g葡萄糖、17.117g海藻糖。

S1中所述血小板預處理液的配置方法包括：將3.214gNaCl、0.157gKCl、0.078gCaCl₂、0.271gMgSO₄、2.604gNaHCO₃、0.714g檸檬酸、1.970g檸檬酸鈉、1.230g乙酸鈉、2.120g葡萄糖、17.117g海藻糖均勻混合后，用超純水溶解并定容至1L，按1ml所述血小板預處理液加入1ul可逆性血小板激活抑制劑的比例加入可逆性血小板激活抑制劑前列腺素E1，然后加入NaHCO₃來調節pH為6.6～6.8，然后用0.22um濾器過濾后備用。

S2中所述血小板凍干緩沖液的制備方法包括：在S1中所述血小板預處理液中加入體積分數為30％(vol/vol)的蛋白質類保護劑調節pH為6.6～6.8，然后用0.22um濾器過濾后備用。

S2中所述蛋白質類保護劑選自血漿。

S3中所述預處理的富血小板血漿的制備方法包括：匯集6-8人份的血小板，通過離心處理并移去上層清液得沉淀A，然后用S1中所述血小板預處理液重懸所述沉淀A，調整所述沉淀A中的血小板計數，在37℃水浴震蕩4h，使血小板保持懸浮狀態，將上述血小板懸液離心處理并移去上層清液得沉淀B；然后將S2中所述血小板凍干緩沖液離心處理并移去上層清液得沉淀C，將所述沉淀B和沉淀C按照等體積混合重懸血小板，即得預處理的富血小板血漿。